| Q：步骤上的可选步骤能否省略？ A：该试剂盒是经过实验验证的, 在进行验证实验的时候实验室都是要做这个可选步骤的, 建议不要省略, 按照说明书操作。 Q：protein A和protein G beads怎么选？ A：各取5ul。 Q：超声破碎冰上操作是必须的吗？4℃条件能否微调？ A：建议冰上操作，4℃可以微调。 Q：beads出现吸不出来的情况，怎么处理？ A：吸之前需注意枪头要剪一下再吸，如若beads吸不上来，可加入等体积的20%乙醇混匀后再吸。 Q：如果没有超声破碎仪的话，能不能用酶解的办法破碎细胞？ A：酶解和超声都可以，酶按照实验室正常使用浓度配制即可。 Q：实验的时候能抗体beads一起加吗？还是说先加抗体再加beads？ A：都可以，但我们建议参考产品说明书使用，先加抗体再加beads。 Q：10*Wash buffer如何稀释？一定要使用配套的吗？ A：dd水稀释即可，最终浓度是1 * washing buffer 即可。 Q：怎么看出现的条带结果？ A：比较关注的是三条泳道，input和IgG以及检测互相作用的泳道，理论上input有一条目的条带， IgG没有条带。如果input没有条带，说明在进行免疫共沉淀之前没有进行WB验证，建议先验证之后 再重新操作。若IgG阴性对照出现条带，是不正常的，应是受重链和轻链的影响，说明使用的二抗 不正确， 建议更换特异性更强的二抗。
Q：阴性对照lgG组后续WB有条带一般是什么原因？ |
关注盖德视界
添加小助手
