细胞爬片免疫荧光，为什么照相出来就跟结冰了一样，有冰晶?

我这两次做的细胞爬片免疫荧光，步骤是多聚甲醛固定10Min，TritonX-1oo 5分钟，BSA封闭1小时，一抗4度过夜，二抗室温1小时，染核后封片，其余步骤用PBS清洗，但是为什么照相出来就跟结冰了一样，有冰晶，是不是因为冬天温度太低的缘故，但是4度的冰箱也不可能结冰啊，O偶有好的片子，结果也没有染上色，好桑心~~~帮我看看酱紫到底怎么回事，做实验做到吐了

这个到底是怎么回事啊？这几次都是这样的啊，各位大神，走过路过，解决困惑~~~下面是好的片子，但是还是没有染上绿色的荧光，么办？