背景技术

金银花是我国常用中药，具有清热解毒、凉散风热之功效。金银花中含有大量的有机酸类化合物，主要药理活性有抗菌作用、抗炎、抑制血小板聚集、抗血栓、抗氧化作用等。异绿原酸a、异绿原酸b和异绿原酸c是二咖啡酰奎宁酸类化合物，是金银花中的有效活性成分，是一类由奎宁酸与数目不等的咖啡酸通过酯化反应缩合而成的有机酸类天然成分，广泛存在于植物界中。

近20年来国内外学者就二咖啡酰奎宁酸类的植物化学和药理进行了深入研究，发现其具有一些重要生物活性，极具临床应用价值。Kimura等研究发现异绿原酸a、异绿原酸b和异绿原酸c能够抑制人外周血多形核白细胞中钙离子A23187诱导的白三烯B4产生，并且异绿原酸b能促进前列腺素E2的形成，呈现较好的抗炎活性。异绿原酸b是双黄连口服液的成分之一，同时也是存在于热毒宁注射液中的抗氧化物质。

异绿原酸a、异绿原酸b和异绿原酸c互为同分异构体，药理活性较好，但是制备高纯度单体的难度较大，这就制约了其药理药效的深入研究，故需要一种快速、简便、高效的制备方法对其进行分离纯化。

提取工艺

取金银花10.0kg，用10倍量70%乙醇回流提取2h，滤渣加8倍量70%乙醇回流提取1h，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.05(25℃)。搅拌加入乙醇至体积分数为80%，静置过夜(12h)，滤过，滤液减压浓缩至无醇味，加水稀释至1:1，静置过夜(12h)，滤过，弃去不溶物，即得金银花提取液，备用。异绿原酸a、异绿原酸b和异绿原酸c的转移率为92.6%。

纯化工艺

(1)树脂预处理：选用D-101型大孔树脂用5%氢氧化钠溶液4BV浸泡24h，加4BV水洗至中性，加5%盐酸溶液4BV浸泡6h，水洗至中性，加95%乙醇浸泡12h后洗脱，至流出乙醇液与水混合不产生白色浑浊为止，用足量水洗至无醇味，备用。

(2)吸附洗脱：取预处理好的D-101型大孔树脂柱(600mmX80mm)，精密量取上述提取液，提取液上柱，吸附完成后先用水洗除去黏液质等杂质，再用15%乙醇洗脱4BV，最后用45%乙醇洗脱4BV，收集45%乙醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，研碎，得异绿原酸粗品165g (异绿原酸a、异绿原酸b和异绿原酸c的质量分数分别为15.7%、8.3%、30.9%)，备用。

(3)异绿原酸b的制备：将乙腈溶液作为A相，0.5%甲酸水溶液为B相，将2个灌注管路分别放入A相和B相中，然后进入洗脱程序表按照优选的溶剂体系比例进行设定(A相32%，B相68%)，时间30 min，体积流量20mL/min，再进入紫外检测器的选择系统，设定波长为326nm。将自制C18填料色谱柱(400mmX80mm，50um)安装好，取(2)项下异绿原酸粗品30.0g，用适量甲醇溶解，分次进样，按上述条件洗脱，并收集保留时间为10.8~12.5、14.2~16.8和18.5~22.0min的组分，减压浓缩收集液，冷冻干燥，其中得到异绿原酸b为白色粉末2.03g(收率为81.5%)。

参考文献

[1]倪付勇,宋亚玲,刘露等.异绿原酸A、B和C的制备工艺研究[J].中草药,2015,46(03):369-373.