如何用高效液相色谱法测定四乙酰核糖的含量？

高效液相色谱法（HPLC）作为一种精准、可靠的分析技术，被广泛应用于药物分析领域，其中包括四乙酰核糖的含量测定。

背景：四乙酰核糖是合成三氮唑核苷（病毒唑）的主要中间体，，一般由天然核苷酸经降解酰化而制得，测定其含量对四乙酰核糖的质量控制以及合成三氮唑核苷有重要意义。经查阅资料目前国外有气相色谱测定方法，国内对四乙酰核糖的含量测定报道较少，主要利用高效液相色谱法。

高效液相色谱法测定

1. 薛继雄等人为了建立高效液相色谱法分离测定四乙酰核糖纯度及相关杂质的方法 ,以YWG 18为分析柱 ,以35 %乙腈为流动相 ,流速为 1ml/min ,检测波长为 210nm ,对四乙酰核糖进行了HPLC法测定在 50 μg/ml～10000 μg/ml浓度范围内呈线性关系 (r =0 .99997) ,且测定方法重现性较好 (RSD <1% ) ,精密度 <1%。该方法简单准确 ,重现性好。可用于分离测定四乙酰核糖纯度及相关杂质。具体方法如下：

1.1 色谱条件：色谱柱:YWG-18 (250 mm×4.6 mm, 5μm) ;检测波长:UVλ210nm;流动相:乙腈∶水 (35∶65) ;流速:1 ml/min;灵敏度:0.02AUFS;柱温:室温。

1.2 实验步骤为：

1.2.1 对照溶液的制备

精密称取四乙酰核糖对照品适量用流动相稀释制成的溶液。

1.2.2 供试品溶液的制备

同对照溶液制备。

1.2.3 实验过程

分别注入液相色谱仪, 进样量20μl, 并按外标法计算供试品纯度。

2. 孙祥德等人以C8色谱柱、乙腈/水/四氢呋喃=34/65/1为流动相分离、210nm紫外检测、外标法定量,测定四乙酰核糖的含量。结果显示,四乙酰核糖的线性范围为0.105.0g.L-1;方法回收率大于99.0%;日内及日间RSD小于2.0%.本方法快速、简便、准确,可用于四乙酰核糖的质量控制。

2.1 色谱条件：色谱分离柱：Spherigel C8柱（4.6mm i.d.×150mm,10μm）；预柱：C8（4.6mm i.d.×25mm）；流动相：乙腈／水／四氢呋喃＝34／65／1；检测波长：210nm；流速：1.5ml／min；柱温：25 ℃ ；进样量：10μl。

2.2.1 将四乙酰核糖样品搅拌溶于甲醇水（甲醇／水＝1∶1）溶液中，室温下静置得柱状结晶，过滤，结晶用蒸馏水洗涤，真空干燥，得四乙酰核糖标准对照品，经HPLC检验，其含量为99.92％。

2.2.2 确称量四乙酰核糖标准品适量,以流动相溶解,配制5.0g·L－1作为标准储备液.将其用流动相稀释,得到0.10、0.50、1.00、2.00、5.00 g·L－1系列标准溶液。分别取上述标准混合液10μl进样，以各组分浓度c对相应的峰面积A回归做标准曲线。结果为四乙酰核糖在0.10～5.0 g·L－1范围内其浓度和峰面积之间线性关系良好，标准曲线方程为：c＝4.449×10－6A＋0.0361，r＝0.9994。

参考文献：

[1]孙祥德,梁宇,齐伟. 高效液相色谱法测定四乙酰核糖的含量 [J]. 河南科学, 2005, (05): 667-668. DOI:10.13537/j.issn.1004-3918.2005.05.013

[2]薛继雄. 四乙酰核糖HPLC法测定 [J]. 药物生物技术, 2001, (02): 98-99. DOI:10.19526/j.cnki.1005-8915.2001.02.010