本文将介绍如何以2'-溴-4'-氟乙酰苯胺为内标物对恩曲他滨进行含量测定，旨在为相关研究人员提供参考依据。

简述：2'-溴-4'-氟乙酰苯胺是一种含氟砌块，常用作合成材料中间体，其外观与性状为白色到近乎白色固体，熔点为117-119℃。2'-溴-4'-氟乙酰苯胺可用于测定恩曲他滨的含量。

恩曲他滨（Emtricitabine）是由吉利德科学公司研制开发的一种HIV逆转录酶抑制剂，属于三类化药新药，其化学名称为4-氨基-5-氟-1-［(2R， 5S)-2-羟甲基-1，3-氧硫杂戊环-5-基］-2(1H)-嘧啶酮，临床上主要用于治疗艾滋病。目前，其含量测定主要采用HPLC法，然而HPLC法费时费力，且得出的绝对含量还需测定其水分、炽灼残渣、残留溶剂等。因此，核磁共振定量法（quantitative nuclear magnetic resonance，qNMR）由于其快速、准确等优势越来越受到分析工作者的重视。

可采用氢核磁共振定量法测定恩曲他滨绝对含量，以4'-溴-2'-氟-乙酰苯胺为内标，在恒温27℃，谱宽为29 296.87 Hz，中心频率为－54 667.50 Hz下采集氟谱。核磁共振法测定恩曲他滨绝对含量具有专属性高、准确、快速等优势。

恩曲他滨的含量测定：

（1）测试条件

qFNMR法测定恩曲他滨含量采用zgfhigqn．2 脉冲序列，测定温度为27℃，谱宽为29 296.87 Hz，射频中心频率为－54 667.50 Hz，弛豫时间 (D1)15 s，采集时间(AQ)5.24 s，采样次数(NS) 为16次，空扫(DS)为4次。

（2）供试品溶液的配制

准确称取16.39 mg恩曲他滨原料药、15.08 mg 4'-溴-2'-氟-乙酰苯胺，加入2 mL DMSO-d6，加热溶解、混匀后转移0.5 m L至核磁管中，作为 qFNMR法测定恩曲他滨含量供试品溶液，待测。

（3）线性考察

准确称取60.37 mg 4'-溴-2'-氟-乙酰苯胺置于10 m L容量瓶中，DMSO-d6溶解后作为内标溶液。用内标溶液分别配制浓度为4.07、6.33、 8.15、14.84、19.66 mg/m L恩曲他滨的一系列溶液。混匀、溶解后各浓度溶液分别转移0.5 m L至核磁管中，获取1 9 FNMR谱。各浓度的1 9 FNMR 谱经相位校正、积分后，以恩曲他滨19 F谱峰与内标19 F谱峰面积之比为横坐标(x)、质量比为纵坐标(y)进行线性回归。qFNMR法线性回归方程为y=1.300 8x+ 0.068 7(r=0.999 0)。因此，恩曲他滨在4.07～ 19.66 mg/m L范围内，定量峰面积与称样量呈线性关系。

（4）色谱条件

色谱柱:Waters C8(250 mm×4.6 mm，5μm); 流动相:V(水)∶V(乙腈)=75∶25(稀磷酸调至pH 5.5);柱温:35℃;检测波长:221 nm;流速:1.0 m L/min。

参考文献：

[1]李宏伟,张红芹,郝海军.核磁共振定量法测定恩曲他滨绝对含量[J].化学试剂,2018,40(08):755-758.DOI:10.13822/j.cnki.hxsj.2018.08.009