人凋亡信号调节激酶I(ASK-1)ELISA试剂盒的背景信息^[1]

ASK-1是一种促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶(MAPKKK)家族中的关键酶，广泛存在于真核细胞中的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路中。通过磷酸化激活MKK3/MKK6-p38和MKK4/MKK7-c-JunNH2-terminalkinase(JNK)途径，ASK-1导致细胞凋亡。ASK-1在多种细胞应答中起关键作用，包括细胞凋亡、增殖和免疫反应。

人凋亡信号调节激酶I(ASK-1)ELISA试剂盒的实验原理^[1]

人凋亡信号调节激酶I(ASK-1)ELISA试剂盒采用固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）进行检测。该试剂盒中包含已知ASK-1浓度的标准品和待测样品。首先将ASK-1物素标记的抗体加入微孔酶标板中，与ASK-1结合。然后加入亲和素标记的HRP，经过温育和洗涤去除未结合的酶结合物。最后加入底物A、B，与酶结合物同时作用，产生颜色。颜色的深浅与样品中ASK-1的活性浓度呈比例关系。

人凋亡信号调节激酶I(ASK-1)ELISA试剂盒的操作步骤

人凋亡信号调节激酶I(ASK-1)ELISA试剂盒的操作流程^[1]

1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50uL。

3. 样本孔中加入待测样本50uL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100uL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350uL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6. 每孔加入底物A、B各50uL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入终止液50uL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

主要参考文献

[1] 张剑飞；汤晓飞；葛丽华；杨晶；牛文雯；张敏；陈彤；细胞凋亡信号调节酶1在口腔白斑细胞凋亡中的作用。《北京口腔医学》