支原体琼脂培养基是一种用于临床解脲脲原体和支原体分离培养的培养基。它由适合解脲和人型支原体生长的营养琼脂培养基和平皿组成。

支原体琼脂培养基的成分包括琼脂粉、纯化水、尿素、酪蛋白胨、大豆蛋白胨、精氨酸和葡萄糖。

支原体是一类没有细胞壁的微生物，可以通过滤菌器，并且可以在人工培养基上增殖。支原体培养是将支原体接种到培养基中，并观察其生长情况以判断是否感染支原体。

支原体的营养要求较高，除了基础营养物质外，还需要加入人或动物血清以提供胆固醇和酵母。支原体的最适pH范围为7.8～8.0，低于7.0会导致死亡，但解脲支原体的最适pH范围为6.0～6.5。

分离培养是支原体实验室诊断的唯一方法。大多数支原体是兼性厌氧菌，在初次分离时加入5%CO2可以促进其生长。支原体生长缓慢，在琼脂含量较少的固体培养基上孵育2～3天后，会出现典型的圆形菌落，中心较厚，向下长入培养基，周边为一层薄的透明颗粒区。解脲支原体在含尿素和以硫酸锰为产氨指标的完全诊断培养基上生长良好，形成具有特征性的深棕色菌落。

牛支原体PCR检测方法的建立及临床应用研究

为了建立牛支原体PCR检测方法并进行临床应用研究，我们采集了病牛的肺脏、肝脏和胸腔渗出物等样品，在支原体肉汤培养基上接种样品，并在20%马血清琼脂培养基上进行培养。经过5～7天的观察判定，我们可以确定是否存在支原体感染。

在肉汤培养基中，支原体生长初期呈轻微浑浊或呈白色点状、丝状生长，后来逐渐均匀浑浊，半透明稍带乳光，不产生菌膜或沉淀，也没有颗粒悬浮。

在20%马血清琼脂培养基上，支原体生长较慢，形成极小的水滴状圆形微细菌落，中央有乳头状突起。

通过姬姆萨染色和显微镜观察，我们发现支原体菌落呈多形态，其中以球点状最常见，大小在125～250 nm之间。我们还对病牛肺部实变组织进行了DNA提取，并以牛支原体、无乳支原体和丝状支原体为阳性对照，利用支原体通用引物扩增其16SrRNA序列，建立了扩增16S rRNA序列进行支原体检测的方法。经过测序并与GenBank公布的支原体16S rRNA基因序列进行比较，发现它们的同源性在97-100%之间。

支原体的培养困难，生长周期长，营养条件苛刻，因此不能作为早期、快速的检测方法。相比之下，PCR技术具有高灵敏性，可以检测样品中微量级的DNA，因此适用于早期检测。

我们设计了4对特异引物，用于快速检测导致牛支原体病的丝状支原体丝状亚种、牛支原体、无乳支原体和绵羊肺炎支原体。通过建立多重PCR方法，我们达到了快速检测的目的。该方法具有特异性强、敏感性高的特点，为临床检测提供了强有力的技术支持，为疑似支原体感染病例的鉴别诊断提供了有效的快速诊断方法。

参考文献

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