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动物体内转染有三个问题,有没有解惑的?

1)如何技术上解决(排除)RNAi的非特异性?是否需要复原实验(Rescue Experiment)。
2)实验的重复性/可靠性如何?需要使用多少只动物,才能实现90-95%可信度?
3)遗传性状改变后能维持多久?如果性状的改变是暂时的,那么经过一段时间后,动物能否恢复到原有的生理状态(没有后遗症)?

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1人参与回答
,工艺专业主任 2019-02-08回答
1.RNAi的非特异性是每个RNAi实验所必须考虑的,一般通过设计多条针对同一个基因的siRNA等,如果都能得到同样的结果,一般认为是特异性的。如果您不能确定是否有非特异性,理论上是需要Rescue Experiment的。但这些实验一般都在细胞实验阶段。在动物实验阶段,可通过合适的对照来排除非特异性。
2.实验的重复性或可靠性和整体的实验分不开,如果基础实验(比如细胞实验)充分,而且又有其他的方法进行印证,那么实验的可靠性就很高,这时动物体内转染就不需要太多动物,几十只动物,能说明问题就可以。但如果其他的实验较少,单纯用一种方法进行实验,就需要排除实验过程的客观因素的影响,比如动物本身的差异,比如实验过程的差异,比如检测方法的误差等。这时就需要动物数量足够,以达到统计学上的误差要求。
3.属于瞬时的转染,对目标基因的改变,一般注射1次,可以维持7-14天左右。随后,随着转入的核酸的代谢,效应减弱消失。动物是否回复到原有的生理状态,这与目标基因有关系。如果希望长期维持动物的转染状态,可以多次注射。
 
 
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