[求助]定点突变pcr产物，转化后提不出质粒？

最近在做定点突变，设计上下游引物30bp左右，突变位点在中间，目的基因3300bp，加质粒总长9000bp左右。

PCR之后用DpnⅠ消除模板，转化JM109或BL21，然后挑菌送测序。最近总出现挑到的菌提质粒浓度很低是（三四十左右），送不了测序的那种，偶尔提出质粒浓度正常的还是模板情况。

而且我发现这种提不出质粒的情况不管IM109还是BL21都会出现，在提质粒过程中，加完P3 buffer混匀后，虽然有絮状沉淀但是液体浑浊（正常加完P3后，出现絮状沉淀，液体澄清透亮）。

之前也做了一批突变，还算正常。最近做的时候就总出现，想不到哪里出了问题。 显示全部