什么是质粒的“载体去磷酸化”（Dephosphorylation）？什么时候必须做？

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张

上海普优文生物科技有限公司进入商铺

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张

，暂无简介 2026-06-08回答

当使用单一限制性内切酶（单酶切）或产生的两个黏性末端相同来切开载体时，载体极易发生自身环化，导致长出的克隆全是对照（假阳性）。原理： DNA 连接酶连接时，需要外源片段 5'-端的磷酸基团（?PO?3?）与载体 3'-端的羟基（?OH）缩合。操作：用碱性磷酸酶（如 SAP 或 CIP）切除载体 5'-端的磷酸基团。这样载体自身无法连接，只有当带有 5'-磷酸的目的片段嵌入时才能完成连接。

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