背景及概述

五氟苯酚生物素酯又称为d-生物素-O-PFP，是一种胺反应生物素衍生物，可与抗生物素或链霉亲和素高亲和力结合。五氟苯酚酯在pH 7-9与胺基反应形成稳定的酰胺键。与其他胺反应性官能团相比，五氟苯酚生物素酯具有更高的反应性，但在水溶液中具有更好的稳定性。五氟苯酚生物素酯不仅与伯胺基团反应，还与仲胺反应。

溶解性

五氟苯酚生物素酯溶于大部分有机溶剂，如：DCM、DMF、DMSO、THF等等，在水中有很好的溶解性。

处理和使用

五氟苯酚生物素酯取用时候需要注意温差，空气湿度，防止吸潮。在反应中尽可能地处于惰性气体保护中。

制备

生物素与抗生物素蛋白（或链霉抗生物素蛋白）缀合物之间的特异性结合亲和力提供了将荧光染料，酶或EM标记物附着到生物分子上的特异性，五氟苯酚生物素酯为生物素化学修饰产物，通过五氟苯酚和D-生物素合成五氟苯酚生物素酯，收率约98%；通过三氟乙酸五氟苯酯和D-生物素合成五氟苯酚生物素酯，收率约95%[1]。

图1 五氟苯酚生物素酯合成反应式

五氟苯酚生物素酯合成

将1mmold-生物素，0.1mmol的N,N-二异丙基乙基胺，0.1mmol的1-羟基苯并三唑，1.2mmol苯酚溶于10ml二甲基甲酰胺中。向混合物中加入1.1mmolN,N'-二环己基碳二亚胺。在室温下反应进行反应24小时，同时摇动。滤出混合物中出现的白色晶体。向溶液中加入10ml二氯甲烷以沉淀五氟苯酚生物素酯。用二氯甲烷洗涤沉淀物，并从甲醇：乙酸乙酯溶液中结晶。五氟苯酚生物素酯的产率为53％，熔点172-174℃，MW为410gr/mol。

应用

五氟苯酚生物素酯是一种 PROTAC linker,属于 alkyl/ether 类。可用于合成 PROTAC 分子。应用于医学研究，药物释放，纳米技术和新材料研究，细胞培养，以及配体研究，多肽合成支持，接枝高分子化合物，新材料和聚乙二醇改性功能涂层等活性化合物方面。

参考文献

[1] Korshun, Vladimir A.; Pestov, Nikolai B.; Nozhevnikova, Elena V.; Prokhorenko, Igor A.; Gontarev, Sergei V.; Berlin, Yuri A.Synthetic Communications, 1996 , vol. 26, # 13 p. 2531 - 2547

生物分子的化学修饰在生物化学，分子生物学和诊断学领域提供了有价值的工具，用于标记，标签和报告分子与生物分子的共价连接的试剂和方法。这些标记的生物分子尤其可用于检测生物样品中的靶组分和分离靶分子。

利用特异性结合实体，如生物素-抗生物素蛋白/链霉抗生物素蛋白系统，可以将荧光染料或酶连接到生物分子上进行检测。生物素与抗生物素蛋白（或链霉抗生物素蛋白）缀合物之间的特异性结合亲和力提供了将荧光染料，酶或EM标记物附着到生物分子上的特异性。五氟苯酚生物素酯是一种生物素化学修饰产物，通过五氟苯酚和D-生物素合成，收率约为98%；通过三氟乙酸五氟苯酯和D-生物素合成，收率约为95%。

如何制备五氟苯酚生物素酯？

五氟苯酚生物素酯，又称为d-生物素-O-PFP，可以通过以下步骤合成：将1mmol d-生物素，0.1mmol DIEA，0.1mmol HOBT，1.2mmol PFP溶于10ml DMF中。向混合物中加入1.1mmol DCC。在室温下反应24小时，同时摇动。滤出混合物中出现的白色晶体。向溶液中加入10ml DCM以沉淀d-生物素-O-PFP。用DCM洗涤沉淀物，并从甲醇：乙酸乙酯溶液中结晶。d-生物素-O-PFP的产率为53％，熔点172-174℃，MW为410gr/mol，O.D。271纳米。

主要参考资料

[1] US2009203879ACTIVATEDLABELINGREAGENTSANDMETHODSFORPREPARINGANDUSINGTHESAME