水解动物蛋白一般为淡黄色液体、糊状体、粉状体或颗粒,富含各种氨基酸;具有特殊鲜味物质和香味。
水解动物蛋白是一种良好的蛋白质。其中含有的十八种氨基酸有七种是人体必需的。还含有人体所必需的部分微量金属元素。因其分子量适中,水溶性好,极易被人体吸收利用,能促进细胞生长、改善人体功能、促进儿童生长发育。广泛应用于口服营养液、果奶、饮料、化妆品等行业。
水解动物蛋白可用作天然氨基酸型调味料,广泛用于各种加工食品和烹调。如与化学调味剂并用,则往往可形成各种独特风味。也用作氨基酸营养补充剂及口服液。
一种水解动物蛋白粉的生产方法,其特征在于:依照下列步骤进行①将动物碎肉经高压破碎,加水磨细,调pH5-7;②加酶进行水解,加酶量0.2%-0.5%,温度50-65℃,时间2小时;③水解后将温度升至90-95℃进行升温灭酶8-10min;④水解产物喷雾干燥,即可得到动物蛋白粉。
本发明还可以采用如下的技术措施:
上述水解酶可以采用木瓜蛋白酶,其水解条件是:加酶量0.2%-0.4%,温度55-65℃,时间2小时,pH5-7。
上述水解酶可以采用复合蛋白酶,其水解条件是:加酶量0.2%-0.4%,温度50-60℃,时间2小时,pH5-7。
上述水解物的喷雾干燥温度是:进风温度130℃、出风温度90℃。
本发明的优点是:1、通过酶的筛选,动物碎肉经酶水解后,蛋白提取率达到75%,总氮量和氨基态氮量分别达到4.61%和2.20%,且精粉风味独特,香气浓郁。2、易于人体吸收。
CN101390563A
植物蛋白是一种来源于植物的蛋白质,与动物蛋白相比,它们的营养价值相仿。大豆是植物蛋白最丰富的来源之一。
动物蛋白是一种与人体营养结构相符的蛋白质。由于来源于动物体本身,其蛋白质的种类和结构更接近人体的蛋白质。
人体蛋白质的主要来源是动物蛋白和植物蛋白,它们具有不同的特性和营养价值。以下是它们的区别。
必需氨基酸是指人体无法自行合成或合成速度无法满足需求的氨基酸,必须通过食物摄入。成人需要摄入八种必需氨基酸。
植物蛋白通常缺少一到两种必需氨基酸,而动物蛋白含有人体所需的全部必需氨基酸。
如果食物中某种或几种氨基酸缺乏,会影响人体蛋白质的合成过程。
衡量蛋白质价值的另一个重要指标是蛋白质在人体中的消化吸收率。蛋白质的氨基酸组成与人体越接近,消化吸收率越高,对人体越有益。
消化校正氨基酸计分(PDCAAS)评估蛋白质中人体必需氨基酸的比例是否符合需求,评价蛋白质被人体消化吸收的比率,最高分为1,表示可以100%被人体吸收,最低分为0。得分为1的蛋白质被认为是优质蛋白质。
不同蛋白质的氨基酸组成不同,消化率也不同,因此PDCAAS值有很大差异。常见的鸡蛋、牛奶的PDCAAS值为1,一般肉类蛋白质在0.9以上,而植物蛋白的PDCAAS值通常在0.4~0.7之间。
对于一般人来说,通过食物摄入蛋白质是传统的方法。然而,大部分肉类食品含有较多脂肪,因此在摄入蛋白质的同时也会摄入过多的脂肪,导致体脂增加和血浆胆固醇含量升高。而通过豆类、蔬菜等植物食物摄入蛋白质时,由于植物不含胆固醇和饱和脂肪,因此可以减少饱和脂肪摄入,降低血浆胆固醇含量。
然而,对于通过蛋白粉摄入蛋白质的健身群体来说,蛋白粉是经过加工提取的高纯度蛋白质原料,含有很少脂肪,不会对血浆胆固醇含量产生影响。
天然的蛋白酶抑制剂是一种小分子蛋白质,其作用是抑制蛋白质水解为氨基酸。蛋白质水解越充分,对人体的消化吸收越有利。
蛋白酶抑制剂在植物中广泛存在,许多农作物如小麦、玉米、豆类、番茄和马铃薯中都含有。在植物贮藏器官中,蛋白酶抑制剂的含量通常达到总蛋白的10%。当植物叶片受到损伤时,也会积累大量蛋白酶抑制剂。
与动物蛋白相比,植物蛋白含有更多的蛋白酶抑制剂,导致植物蛋白的水解程度较低,因此不利于人体的消化吸收。
哺乳动物蛋白抽提试剂是一种快速、温和、高效的方法,用于裂解哺乳动物细胞并提取细胞核和细胞浆中的蛋白质。该试剂采用温和的配方,保持提取的蛋白质的生物活性,可用于多种蛋白质分析实验,如报告基因和酶活性测定、免疫检测和蛋白纯化等。提取后的蛋白质可以使用BCA法进行定量分析。此外,试剂中含有蛋白酶抑制剂混合物,可以有效防止蛋白质在提取过程中的降解。
1、本产品适用于裂解细胞培养板培养的贴壁细胞(无需刮取)以及离心收集的悬浮细胞,比反复冻融或超声法具有更高的提取效率。但对于组织蛋白的抽提,建议使用组织蛋白抽提试剂盒(WE0260)。
2、所列的是贴壁细胞蛋白提取的最佳使用量,先收集细胞可以减少试剂用量,从而获得更高的蛋白浓度。
3、可以根据细胞数量估计抽提试剂的使用量。例如,2×10^6个Hela细胞约重20mg,需要加入200μl抽提试剂。
4、通过本产品提取的蛋白质可以使用BCA法进行定量分析。
1. 贴壁细胞蛋白抽提:在蛋白抽提前取出实验所需Mammalian Protein Extraction Reagent进行预冷。小心倾去贴壁细胞的培养液,使用PBS漂洗细胞。加入适量Mammalian Protein Extraction Reagent(抽提蛋白前2-3分钟按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail),在冰上用枪头吹打贴壁细胞,将裂解液转移至离心管中,冰上孵育20分钟,让细胞充分裂解。14000×g离心5-10分钟。转移上清液至新管中,用于进一步分析。
2. 悬浮细胞蛋白提取:在蛋白抽提前取出实验所需Mammalian Protein Extraction Reagent进行预冷。将悬浮细胞2,500×g,离心10分钟,弃去上清。使用PBS漂洗细胞。2,500×g,离心10分钟,弃去上清。加入适量Mammalian Protein Extraction Reagent,抽提蛋白前2-3分钟按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail,即1×工作液。每100 mg细胞加入至少1ml 1×工作液。如提取的样本量较大,可首先使用少量1×工作液重悬细胞,然后加入剩余工作液。吹打均匀后,冰上放置20分钟,让细胞充分裂解。14000×g离心15分钟。转移上清至新管中,进行下一步分析。
[1] 中国中学教学百科全书·生物卷
动物细胞蛋白质提取过程中,有些蛋白质难以溶解,需要使用变性裂解液进行提取。这种裂解液适用于不溶性细胞骨架、膜蛋白、高度疏水蛋白,或者集聚并形成沉淀的蛋白,以及体外翻译产生的蛋白。它可以用于SDS-PAGE、等电点聚焦和2-D电泳。
在常温下运输后,将溶液A和溶液B放在-20°C环境中保存,保质期为两年。
1. 贴壁细胞,去除培养液,用PBS洗涤。
2. 悬浮细胞,离心收集,再次用PBS洗涤。
3. 每107个细胞或100 mm培养板或150 cm2培养瓶,加入1 mL溶液A和10 μL溶液B。
4. 冰上放置5-10分钟,可用枪头轻轻吹打促进细胞裂解。
5. 轻轻倾斜培养皿使裂解产物流向瓶皿的一边或一角,然后将其转移到1.5 mL离心管。
6. 在冰上放置5分钟,期间剧烈震荡3-4次,每次30秒。
7. 以12000 rpm(12830g),4°C离心5分钟,取上清,即可进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
1. 将组织剪切成细小的碎片。
2. 每100毫克组织加入1 mL溶液A和10 μL溶液B。
3. 置于玻璃匀浆器冰上均质30~50次,或使用超声破碎细胞,每次30秒,3~4次,每次间隔1分钟,置于冰上冷却。
4. 均质或超声破碎细胞后,镜检细胞破碎率不小于90%,同时组织已经完全裂解,没有明显的小组织块。
5. 将匀浆物转移到1.5 mL离心管,在冰上放置10分钟,期间剧烈震荡3-4次。
6. 以12000 rpm,4°C离心5分钟,取上清,即可进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
已经提取的细胞骨架膜蛋白、膜蛋白或高度疏水蛋白,或者集聚并形成沉淀的蛋白的溶解方法如下:
将1-5 mg的相关蛋白质样品加入1 mL的溶液A和10 μL溶液B混合,静置30分钟,涡旋震荡1分钟,离心后取上清。
1. 若溶液A有沉淀析出,可置于30°C水浴中保温10分钟,并震荡混匀,待沉淀完全溶解后,冷却至室温后即可使用。
2. 裂解液中蛋白样品含有影响因子,不能用Bradford法和BCA法测定蛋白浓度,但可使用改良型Lowry法或非干扰型蛋白定量试剂盒测定。
3. 在细胞裂解时,如果在进行步骤4前裂解液比较粘,可以先匀浆或超声以剪断基因组,再离心取上清。
[1] 王义强 谭晓风 陈介南 周小慧 孙吉康;银杏雌树成熟叶cDNA文库的构建。《中南林业科技大学学报:自然科学版》2009年 第1期。
无动物源性胰蛋白酶/EDTA是一种重组酶,可用于消化贴壁细胞,替代动物胰腺来源的消化酶。与天然胰蛋白酶制剂相比,本产品具有更高的特异性,适用于无血清培养体系中的贴壁细胞消化。本产品溶剂为PBS/1mM EDTA,为即用型产品,不含酚红。
1. 将无动物源性胰蛋白酶/EDTA和完全培养基在37℃复温。
2. 丢弃待消化的培养瓶中的培养基上清。
3. 用5 ml无钙镁离子的PBS清洗细胞层,并丢弃洗液。
4. 在培养瓶中加入适量的无动物源性胰蛋白酶/EDTA(例如:75cm2培养瓶中加入5ml消化液),确保贴壁细胞层完全被消化液浸没。
5. 在37℃下孵育,直至细胞被完全消化(使用倒置显微镜观察,确保细胞完全被消化)。可以轻拍瓶底,帮助细胞解离。
6. 在培养瓶中加入5-10ml的完全培养基,倾斜培养瓶以各个角度冲洗,然后将液体转入15ml离心管。
7. 以100g离心5-10分钟。
8. 去除上清后,用2-5ml复温的完全培养基重悬。
9. 确定细胞浓度和活力。
10. 根据细胞特性以一定的浓度接种细胞,即可进行培养。
植物蛋白是一种从植物中提取的蛋白质,与动物蛋白相似。大豆是其中最丰富的来源。
植物蛋白和动物蛋白是人体蛋白质的主要来源,它们具有不同的性质和营养价值。
动物蛋白与人体的营养结构相容。它的种类和结构更接近于人体的蛋白质。
动物蛋白含有更多的人体必需氨基酸,可以更好地满足人体的营养需求。
动物蛋白的氨基酸组成更接近于人体,因此其消化吸收率更高。
通过摄入植物蛋白,可以减少饱和脂肪的摄入量,降低血浆胆固醇水平。
植物蛋白含有较多的蛋白酶抑制剂,不利于人体对蛋白质的消化吸收。