多克隆抗体制备服务是一项技术服务，根据需求制备多克隆抗体。该服务使用SPF级兔、大鼠、小鼠和豚鼠等免疫物种。多克隆抗体制备可以使用小分子、多肽、修饰多肽、蛋白、融合蛋白、修饰蛋白等作为抗原。制备的多克隆抗体可用于Western Blot、ELISA和IHC等多种应用。
抗体的特异性取决于抗原分子的决定簇，多克隆抗体能够识别多个抗原表位。由于具有可识别多个表位、可引起凝集反应、沉淀反应等优点，多克隆抗体被广泛应用于免疫学诊断领域。
1. 提供抗原，要求纯度>85%，浓度>0.5 mg/mL，至少1.5 mg。
2. 免疫2只FPS动物，共进行3次免疫。
3. 采集1mL免疫前血清，作为阴性对照。
4. 采集免疫后2只FPS动物的多抗血清，分别进行ELISA效价检测试验。
5. 提供ELISA检测报告和1mL免疫前血清。
通过克隆EGFL6全长及片段基因，构建pET32a（+）-EGFL6全长及片段蛋白原核表达载体，诱导表达并鉴定全长EGFL6蛋白及片段蛋白，并利用EGFL6片段蛋白免疫制备抗EGFL6多克隆抗体，应用其检测人肿瘤细胞系中EGFL6全长蛋白，为深入研究EGFL6的相关功能奠定了基础。
方法：
1. 克隆EGFL6全长基因并进行原核表达，通过PCR扩增EGFL6全长基因，将其连接到表达载体pET32a（+）上，诱导表达并通过SDS-PAGE和Western blot检测和鉴定目的蛋白的表达。
2. 检测肿瘤细胞株中EGFL6的表达，提取总RNA，反转录成cDNA后，利用实时荧光定量PCR方法检测EGFL6基因的表达水平。
3. 克隆和表达肿瘤细胞株中EGFL6基因片段，通过PCR扩增EGFL6片段基因，将其连接到表达载体pET32a（+）上，诱导表达并通过SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白的表达。
4. 纯化EGFL6片段蛋白并制备抗EGFL6的多克隆抗体，利用镍离子亲和树脂进行纯化，以纯化产物免疫昆明小鼠制备抗EGFL6的多克隆抗体，该多克隆抗体经沉淀和纯化后，用于对肿瘤细胞裂解物进行Western blot检测分析。
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当机体受到抗原刺激后，会产生抗体。抗体的特异性取决于抗原分子的决定簇，而不同抗原分子具有多个抗原决定簇。因此，免疫动物产生的抗血清实际上是多种抗体的混合物。一种蛋白质激素的表面存在多个不同的抗原决定簇，可以与B淋巴细胞表面的相应受体结合。一个B淋巴细胞表面只能与一个抗原决定簇结合。当一个静止的B细胞与抗原决定簇结合后，就会被活化并增殖和分化为一群合成和分泌抗相应抗原决定簇抗体的浆细胞，这一群细胞被称为一个克隆。经典动物免疫法得到的抗血清中含有多种由不同克隆产生的、抗不同抗原决定簇的抗体，称为PCAb。自身免疫性内分泌疾病患者血清中存在的抗某一自身抗原（例如甲状腺过氧化物酶）的抗体，也可以具有多克隆性质，也可称为多克隆抗体。
为了制备多克隆抗体，可以利用间接还原胺化法制备亲和层析柱，并优化反应条件。可以使用高氯酸沉淀、离子交换和亲和层析等方法从人血清中纯化抗原，制备兔源多克隆抗体。常规兔源多克隆抗体制备包括以下几个步骤：多肽设计与合成、原核蛋白制备（包括c DNA合成、载体构建、蛋白表达和纯化等）、免疫阶段（包括ELISA检测等）、纯化与检测（包括亲和纯化和特异性亲和纯化等）。
[1]中华医学百科大辞海
[2]现代药学名词手册
[3]自制肝素亲和柱分离纯化载脂蛋白H及其抗体制备与鉴
兔多克隆抗体制备是通过刺激兔机体产生免疫学反应，从而合成并分泌与抗原有特异性结合能力的一组免疫球蛋白。抗体根据靶位点的不同分为单克隆抗体和多克隆抗体，而多克隆抗体是由多个B淋巴细胞克隆产生的，可以与多种抗原表位结合。抗原具有抗原性和免疫原性两个基本特性。
为了制备兔多克隆抗体，需要经过制备抗原、选择实验动物、动物免疫、测试免疫效果、采集全部血清、纯化抗体以及鉴定抗体等步骤。
兔多克隆抗体制备具有以下优势：
兔多克隆抗体制备可用于小分子、多肽、修饰多肽、蛋白、融合蛋白、修饰蛋白检测中二级抗体制备。多克隆抗体在深固定的样本中表现出良好的效果，在石蜡包埋组织切片的染色中应用广泛。此外，多克隆抗体还被用于农药残留现场监测、病原物的检测、疾病的诊断和治疗等领域。
例如，兔多克隆抗体可以用于制备EB病毒潜伏膜蛋白1的原核表达蛋白及其多克隆抗体，并检验其生物学特性。
多克隆抗体制备是一种通过刺激机体产生免疫反应来制备免疫球蛋白的过程。多克隆抗体具有识别多个抗原表位、引起沉淀反应的特点，因此在研究和诊断方面得到广泛应用。
制备多克隆抗体的步骤包括：
1、制备抗原。
2、选择实验动物。
3、对实验动物进行免疫。
4、测试免疫效果。
5、采集全部血清。
6、纯化抗体。
7、鉴定抗体的纯度和特异性。
研究人员克隆了ISG60和ISG43基因，并将其连接到pMD18-T载体，然后插入PET-32a（+）克隆位点。经过诱导表达和纯化后，获得了对ISG43和ISG60蛋白具有高反应性和特异性的多克隆抗体。
通过Western Blot检测，这些抗体能与原核表达蛋白和经PolyI:C诱导产生的相应蛋白发生特异性反应。
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羊多克隆抗体制备是通过免疫羊来收集血清或直接使用抗血清进行检测，或进行纯化以获取纯化的抗体。多克隆抗体是由免疫的宿主通过不同来源（多克隆）的B细胞分泌产生的抗体。多克隆抗体能识别同一抗原的多个不同表位。制备多克隆抗体的原理是抗原刺激机体，产生免疫学反应，由机体的浆细胞合成并分泌与抗原有特异性结合能力的一组免疫球蛋白，即抗体。
抗体根据靶位点的不同分为单克隆抗体和多克隆抗体。多克隆抗体由多个B淋巴细胞克隆产生，可以与多种抗原表位结合。相比同物种来源的单克隆抗体，多克隆抗体制备成本低、周期短、能同时检测同一抗原的多个表位，适用于免疫沉淀、ELISA等实验，并具有更高的亲合力（avidity）。
抗原有抗原性和免疫原性两个基本特性。抗体是能与特异性抗原结合的免疫球蛋白。制备多克隆抗体时，需要使用完全抗原，即经过一定的改造后才能成为完全抗原。完全抗原的分子量越大、结构越复杂，引起免疫反应的能力越强。
制备羊多克隆抗体的一般流程包括：完全抗原的准备→羊的免疫→效价检测和终放→抗体亲和纯化→抗体的浓缩和保存。
羊多克隆抗体制备可用于小分子、多肽、修饰多肽、蛋白、融合蛋白、修饰蛋白的杂交细胞种类及效价检测。例如，在山羊c-Myc基因的原核表达及多克隆抗体和单克隆抗体的制备实验中，需要羊抗c-Myc蛋白的多克隆抗体以便用于间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞。c-Myc是一种重要的原癌基因，它在维持胚胎干细胞的生物学特性和诱导多性干细胞形成的过程中发挥重要作用。因此，制备其相应的多克隆抗体和单克隆抗体非常必要。
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当机体受到抗原刺激后，会产生特异性的抗体。抗体的特异性与抗原分子的决定簇有关，每个抗原分子都有多个抗原决定簇。因此，免疫动物产生的抗血清实际上是多种抗体的混合物。一种蛋白质激素的表面有多个不同的抗原决定簇，可以与B淋巴细胞表面的相应受体结合。一个B淋巴细胞表面只能与一个抗原决定簇结合。当一个静止的B细胞与抗原决定簇结合后，就会被激活并增殖和分化为一群合成和分泌抗相应抗原决定簇抗体的浆细胞，这一群细胞称为一个克隆。经典动物免疫法得到的抗血清中含有多种由不同克隆产生的、抗不同抗原决定簇的抗体，称为PCAb。自身免疫性内分泌疾病患者血清中存在的抗某一自身抗原（例如甲状腺过氧化物酶）的抗体，也可以具有多克隆性质，也可称为多克隆抗体。AMSH别名STAMBP，MGC126516，MGC126518，STAM结合蛋白。AMSH（STAM的SH3结构域的相关分子）是含有JAMM结构域的蛋白质，其调节表皮生长因子受体1（EGFR1）的细胞内分选。重组AMSH在体外作为去泛素化酶起作用，并且通过用AMSHsiRNA孵育细胞来消除AMSH活性，增强EGFR1的降解。在其结合配体STAM2存在下，AMSH介导的K63连接的泛素链的切割增强。
抗AMSH多克隆抗体（STAM的SH3结构域的相关分子）是针对与人STAMBP蛋白的Gly194周围的残基相对应的合成肽，免疫原为人源全长AMSH重组蛋白，与人全长AMSH有特异性反应。抗AMSH多克隆抗体（STAM的SH3结构域的相关分子）可用于蛋白质印迹（1：1000），免疫沉淀（1:50）、IP(1:50)、WB(1:1000)等。抗AMSH多克隆抗体（STAM的SH3结构域的相关分子）仅在4°C下短期储存。为了长期储存并避免反复冻融，需等分并储存在-20°C。等分试样在-20°C下稳定至少12个月。
[1]中华医学百科大辞海
[2]现代药学名词手册
目前，常使用酶的多克隆抗体作为热启动的方法。酶抗体与酶结合后可以抑制DNA聚合酶的活性。在扩增过程中，抗原抗体复合物能够在高温变性之前抑制聚合酶的活性，从而有效地阻止引物的非特异性退火和引物二聚体导致的非特异性扩增。高浓度的Taq酶抗体在反应的变性步骤中会变性，释放出聚合酶的活性，实现热启动的目的。
制备酶的多克隆抗体的实验方法如下：
首先，选择小鼠C57/BL6作为动物模型。然后，向小鼠体内注射抗原，并加强免疫。一段时间后，取血测量抗血清中抗体的量。当抗体产量不再明显上升时，停止免疫并取得抗血清。所得的抗血清经过简单纯化后即可用于实验研究。抗体增量示意图如下：
为了最大限度地促进反应的进行，抗原与抗体需要以合适的比例孵育结合。抗体量不足时，无法有效抑制抗原化酶在常温下的活性。而抗体量过多时，大量蛋白的存在会严重影响反应的效率。因此，我们可以将得到的抗体分别稀释2、4、8、16、32倍，然后将梯度稀释的抗体与抗原按1:1的比例混匀后置于37°C下孵育4-5小时。
我们可以使用琼脂糖双向免疫扩散实验来检测高浓度Taq酶抗体。该实验原理是在一定的条件下，当可溶性抗原与相应的抗体在电解质存在的情况下相遇，经过一定时间会出现人眼可见的沉淀现象。这种沉淀反应中的抗原称为沉淀原，相应的抗体称为沉淀素。
琼脂糖凝胶是一种多孔的网状结构，分子量较大的物质可以自由通过。我们可以将适当浓度的琼脂糖凝胶与抗原和抗体混合后，观察是否出现白色的沉淀线。若抗原与抗体呈特异性结合且比例适当，就会出现沉淀线。这种方法可以通过双向琼脂扩散实验来实现，常用的孔型有双孔型、三孔型、双排孔型和梅花孔型。
[1] 高纯度聚合酶制备技术研究
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当机体受到抗原刺激后，会产生抗体。抗体的特异性取决于抗原分子的决定簇，每个抗原分子都有多个抗原决定簇。因此，由免疫动物产生的抗血清实际上是多种抗体的混合物。一种蛋白质激素的表面有多个不同的抗原决定簇，可以与B淋巴细胞表面的相应受体结合。一个B淋巴细胞表面只能与一个抗原决定簇结合。当一个静止的B细胞与抗原决定簇结合后，就会被激活并增殖和分化为一群合成和分泌抗相应抗原决定簇抗体的浆细胞，这一群细胞称为一个克隆。经典动物免疫法得到的抗血清中含有多种由不同克隆产生的、抗不同抗原决定簇的抗体，称为PCAb。自身免疫性内分泌疾病患者血清中存在的抗某一自身抗原（例如甲状腺过氧化物酶）的抗体，也可以具有多克隆性质，也可称为多克隆抗体。
UMO1(UBL1;MIM601912)是一种类似于泛素的蛋白质，可以与其他蛋白质共价结合。SENP2是一组酶，它将新合成的SUMO1加工成可结合的形式，并催化对含苏素的物种的分解。SENP6是SUMO/sentrin特异性蛋白酶，其功能是从缀合蛋白中去除SUMO。SENP6已经被证明是去SUMO化配体激活的转录因子成员，称为类视黄醇X受体a。RXRa的转录活性受SUMO化的调节。研究人员已经证明SENP6优于SUMO2/3缀合物而不是SUMO1缀合物。
Senp6core多克隆抗体（SUMO1sentrin特异性蛋白酶6）的浓度为1mg/ml，缓冲液为0.01MTBS(pH7.4)，1%的BSA，0.03%的丙二醇和50%的甘油。Senp6core多克隆抗体（SUMO1sentrin特异性蛋白酶6）的免疫原为KLH共轭合成肽，由人类的SENP2衍生而来。预测的分子量为68kDa。该抗体可以短期储存在4℃，长期储存在-20℃（避免重复冷冻/解冻循环）。在Western Blot实验中，Senp6core多克隆抗体（SUMO1sentrin特异性蛋白酶6）的稀释浓度为1：500-2000，而在免疫组化实验中的稀释浓度为1：100-500。
[1]中华医学百科大辞海
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[3] sumo化在肿瘤发生中的作用及机制
[4]OTUB1和OTUB2对细胞抗病毒信号转导的调控机制
兔抗马多克隆抗体是一种能够特异性结合马IgG的多克隆抗体，广泛应用于Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验中。
检测原理：采用双抗体夹心法来测定样本中马IgG的水平。首先，在微孔板上包被纯化的马IgG抗体，形成固相抗体。然后，依次加入马IgG样品和标记有HRP的马IgG抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过充分洗涤后，加入底物TMB进行显色。TMB在HRP酶的催化下转化为蓝色，经酸处理后转化为最终的黄色。颜色的深浅与样品中马IgG的浓度呈正相关。通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），根据标准曲线计算样品中马IgG的浓度。
抗原通常由多个抗原决定簇组成，当一个抗原决定簇刺激机体时，由一个B淋巴细胞产生的抗体称为单克隆抗体（Monoclonal Antibody）。
当多个抗原决定簇刺激机体时，会产生多种不同的单克隆抗体，这些单克隆抗体混合在一起就形成了多克隆抗体。机体产生的抗体除了抗原决定簇的多样性外，还可以产生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五类抗体。
抗原刺激机体后，机体的浆细胞会合成并分泌一组与抗原特异性结合的免疫球蛋白，这就是抗体。
畜禽鲜肉及生肉制品的掺假和冒充现象普遍存在，目前还没有非常成熟、可靠、廉价且适用于现场检验和商业化开发的鉴别畜禽肉掺假和冒充的方法。免疫球蛋白G（Immunoglobulin G，IgG）是一种存在于血液和组织液中物种特异性较强的蛋白质。
目前关于以IgG为目标抗原进行肉品物种鉴定的研究报道较少。本研究以IgG为目标抗原，利用免疫琼脂糖凝胶双扩散试验来鉴定牛羊肉中是否掺入马肉、猪肉或鸭肉；同时观察评价抗IgG血清的交叉反应性，即其物种特异性，并探索避免交叉反应的策略；评估掺假肉的检出限和结果的重现性，以验证以IgG为目标抗原建立免疫学方法鉴别家畜肉真实性的可行性。
研究结果显示，除了兔抗鸭IgG血清外，兔抗马IgG血清和兔抗猪IgG血清与牛和绵羊IgG或肉浸出汁存在一定的交叉反应。通过适当稀释抗血清可以避免交叉反应的发生。山羊抗马IgG血清和山羊抗猪IgG血清与牛、绵羊和骆驼IgG或肉浸出汁没有交叉反应。这表明使用与牛羊同科的山羊制备目标IgG抗血清可以避免与牛羊IgG的交叉反应。
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