人角化细胞生长因子ELISA KIT的应用及操作步骤? 背景信息 人角化细胞生长因子(KGF)ELISA KIT是一种用于定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中人角化细胞生长因子(KGF)含量的试剂盒。该试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)原理。通过将标本、标准品和HRP标记的检测抗体依次加入预先包被人角化细胞生长因子(KGF)捕获抗体的包被微孔中,经过温育和洗涤后,使用底物TMB显色并测定吸光度(OD值),从而计算样品浓度。 样本处理及要求 1.血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后离心,取上清即可检测,或将标本冷冻保存,但应避免反复冻融。 2.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内离心,或将标本冷冻保存,但应避免反复冻融。 3.细胞培养物上清或其他生物标本:离心后取上清即可检测,或将标本冷冻保存,但应避免反复冻融。 注:溶血标本不适合进行此项检测,因为溶血会影响最后的检测结果。 操作步骤 1.从室温平衡20分钟后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条密封保存。 2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔中加入不同浓度的标准品,样本孔中加入待测样本,空白孔不加。 3.标准品孔和样本孔中加入HRP标记的检测抗体,封住反应孔,温育60分钟。 4.洗板5次,每次加入洗涤液并甩去洗涤液。 5.加入底物A、B并孵育15分钟。 6.加入终止液并测定各孔的OD值。 应用及研究 用于人角化细胞生长因子-1的克隆及其在骨髓基质细胞中的表达 该研究从人胚肺成纤维细胞中克隆人角化细胞生长因子-1(KGF-1)编码区序列,并构建了真核荧光表达载体。通过提取总RNA并进行反转录PCR,获取KGF-1cDNA编码区序列,将其与质粒载体连接,构建了重组表达载体。通过免疫荧光法检测骨髓基质细胞中KGF-1蛋白的表达,结果表明成功构建了重组质粒,并初步探讨了该基因在骨髓基质细胞中的表达。 参考文献 [1] Smith P D, Polo M, Soler P M, et al. Efficacy of growth factors in the accelerated closure of interstices in explanted meshed human skin grafts. Journal of Burn Care and Rehabilitation. 2000. [2] Rubin J S, Osada H, Finch P W, et al. Purification and characterization of a newly identified growth factor specific for epithelial cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 1989. [3] Marti G P, Makary M A, Ferguson M, et al. Transfection with keratinocyte growth factor 1 cDNA with electroporation improves wound healing in an aged mouse model. Journal of Surgical Research. 2004. [4] Waldeck H, Chung A S, Kao W J. Interpenetrating polymer networks containing gelatin modified with PEGylated RGD and soluble KGF: Synthesis, characterization, and application in in vivo critical dermal wound. Journal of Biomedical Materials Research. 2007. [5] 朱国强, 李袁飞, 冯晋斌, 胡德华. 人角化细胞生长因子-1的克隆及其在骨髓基质细胞中的表达. 西南国防医药. 2010. 查看更多
人胱硫醚Β-合酶ELISA KIT的应用及意义? 人胱硫醚Β-合酶(CBS)ELISA KIT是一种用于测定标本中人胱硫醚Β-合酶(CBS)水平的双抗体夹心法。该试剂盒利用纯化的人胱硫醚Β-合酶(CBS)抗体包被微孔板,形成固相抗体。然后,将胱硫醚Β-合酶(CBS)样品加入微孔中,并与HRP标记的胱硫醚Β-合酶(CBS)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后,加入底物TMB进行显色。根据显色的深浅可以计算样品中胱硫醚Β-合酶(CBS)的浓度。 ELISA KIT流程是通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),并利用标准曲线计算样品中胱硫醚Β-合酶(CBS)的浓度。 胱硫醚Β合成酶(CBS)是一种细胞质中的同源四聚体,由63 KD的亚基组成,是一种磷酸吡哆醛(pyridoxal phosphate,PLP)依赖性酶。在维生素B6的催化下,CBS能够合成胱硫醚。作为影响同型半胱氨酸(Hcy)水平的关键酶,CBS在Hcy转变成胱硫醚的转硫酸路径中起着重要作用。该酶在血液中同型半胱氨酸的检测中被广泛应用。 人胱硫醚Β-合酶(CBS)在子宫内膜异位症病灶中的表达及意义研究 本研究旨在探究CBS在子宫内膜异位症病灶形成中的作用及可能的机制,为子宫内膜异位症的治疗提供潜在的靶向。研究方法包括通过免疫组化检测正常子宫内膜和异位内膜中CBS的表达,以及通过免疫细胞化学染色方法检测CBS在正常和异位子宫内膜间质细胞的表达。此外,还通过细胞增殖实验和小鼠模型观察CBS抑制剂和CSE抑制剂对子宫内膜异位症病灶的影响。 研究结果显示,子宫内膜异位症的异位内膜组织中CBS的表达明显增加。此外,实验结果还表明,硫氢化钠和吡咯烷二硫代氨基甲酸酯对正常子宫内膜间质细胞的增殖有促进作用,而CBS抑制剂和CSE抑制剂能够显著减少子宫内膜异位症病灶的重量和数量。 参考文献 [1] Jacques Donnez, Robert N. Taylor, Hugh S. Taylor. Partial suppression of estradiol: a new strategy in endometriosis management? Fertility and Sterility. 2017(3) [2] Robert F. Casper. Introduction: A focus on the medical management of endometriosis. Fertility and Sterility. 2017(3) [3] Soo Hyun Ahn, Stephany P. Monsanto, Caragh Miller, Sukhbir S. Singh, Richard Thomas, Chandrakant Tayade, Claude Hughes. Pathophysiology and Immune Dysfunction in Endometriosis. BioMed Research International. 2015 [4] Jerzy Betowski. Hydrogen sulfide in pharmacology and medicine – An update. Pharmacological Reports. 2015(3) [5] 曹艳玲. 胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和胱硫醚-β-合成酶(CBS)在子宫内膜异位症病灶中的表达及意义[D]. 苏州大学, 2017. 查看更多