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DNA连接酶3抗体的应用及构建CD147/HAb18G基因原核表达载体的方法？背景 [1-3] DNA连接酶3抗体是一种多克隆抗体，能够特异性结合DNA连接酶3。它在多种免疫学实验中被广泛应用，包括Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等。 DNA连接酶，也被称为DNA黏合酶，在分子生物学中起着关键的作用，即将两条DNA黏合成一条。无论是双股还是单股DNA的黏合，DNA黏合酶都能够通过形成磷酸酯键将DNA的3'端与5'端连接在一起。虽然细胞内还存在其他蛋白质，如DNA聚合酶，它可以在一条DNA作为模板的情况下，通过聚合反应形成磷酸双酯键来黏合DNA。然而，DNA聚合酶的黏合过程只是一个附带的功能，真正在细胞内扮演DNA黏合反应的角色是DNA黏合酶。除了在细胞内的黏合反应中发挥重要作用，DNA黏合酶也被广泛应用于分子生物学实验室中进行重组DNA的实验，这也被认为是其另一个重要的功能。应用 [4][5] 如何构建CD147/HAb18G基因原核表达载体并进行体外生物活性检测？构建CD147/HAb18G基因原核表达载体并尝试在原核表达系统中表达CD147/HAb18G蛋白，是本课题的首要目标。同时，检测原核表达的CD147/HAb18G蛋白是否具有抗原性，对于筛选新型HAb18单抗是否能取得突破性进展至关重要。为了实现这一目标，我们使用PCR方法扩增HAb18G基因的全长cDNA，并将扩增片段与质粒载体pRSET进行连接，构建表达载体。通过酶切鉴定和测序验证插入片段的正确性。将重组表达载体转染至大肠杆菌BL21(DE3)，在IPTG诱导下表达蛋白，并通过SDS-PAGE和激光薄层扫描检测蛋白表达量。使用Ni-NTA柱亲和层析纯化融合蛋白，并通过SDS-PAGE验证纯化效果和蛋白的分子量。最后，利用纯化的融合蛋白进行酶联免疫吸附测定，检测CD147/HAb18G原核表达蛋白的生物活性。参考文献 [1]degragation of basment membrane Type IV collagen and lung subendothelial metrix by rat mammary adenocarcinoma cell clones of differing metastatic potential.Nakajima M,Welch DR,Belloni PN,et al.Cancer Research.1987 [2]radioimmunology-imaging and therapy.Larson SM.Cancer.1991 [3]Human keratinocytes Express EMMPRIN,an Extracellular Matrix Metalloproteinase Inducer.Decastro R,Zhang.Y,Guo H,et al.J.InvestDermatol.1996 [4]Cell surface iramunophenotype and gelatinase activity of the human breast carcinoma cell line(MCF-7/6)with functionally defective E-cadherin.Hlavcak P,Sedlakova 0,Sedlak J,et al.Neoplasma.1999 [5]许鹏.肝癌相关抗原CD147/HAb18G基因原核表达载体构建、表达、产物纯化及体外生物活性检测[D].第四军医大学,2002.查看更多

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二乙基锌的制备方法及应用？二乙基锌是一种无色、透明、有恶臭的液体，具有自燃性和与醇类、酸类发生激烈反应的特性。它可以溶于脂肪族饱和烃和芳香族烃中，最高允许浓度为50mg/m 3 。通过将碘乙烷与锌钠合金或铜锌合金反应并提纯，可以制得纯度为99.999%的二乙基锌。这种化合物在半导体生产的MOCVD工艺、外延生长和聚合反应的催化剂中有广泛应用。制备方法在实验室中，可以使用1000ml四口玻璃烧瓶作为主反应器，并配备球型冷凝管、恒压漏斗、温度计套管和不锈钢搅拌器，并连接至氮气系统。制备过程中需要600g的6N锌粉、250ml的碘乙烷和250ml的溴乙烷。具体操作步骤如下： (一) 锌粉的处理：将600g锌粉放入带有插底管的1000ml玻璃瓶中，通入干燥的氢气，加热至200℃，保持温度在200~250℃通氢气30min，然后降温至室温。 (二) 安装主反应釜并充氮气置换，加入已处理好的锌粉、碘乙烷和溴乙烷混合溶液，再加入碘化亚铜和二乙基锌溶液。升温至58~60℃，进行反应。 (三) 当温度降至80℃左右时，加入剩余的混合溶液，继续反应并冷却。加热至140℃，保持反应1小时。 (四) 反应结束后，自然冷却并进行蒸馏，得到二乙基锌溶液。通过多次试验，反应的引发时间不超过40min，反应产率稳定在85%左右。应用根据CN201110210815.9的公开内容，可以利用稀土三元催化剂催化丙交酯、环氧丙烷和CO 2 的聚合反应，制备丙交酯-环氧丙烷-CO 2 三元共聚物。这种方法具有聚合时间短、醚段含量低等优点，适用于工业化生产。参考文献 [1] 精细化工辞典 [2] [中国发明,中国发明授权]CN200610046867.6二乙基锌的制备方法 [3] CN201110210815.9一种用稀土三元催化剂制备丙交酯-环氧丙烷-CO 2 三元共聚物的方法查看更多

#二乙基锌

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3-甲基-5-羟基-1H-吲唑的医药应用及其作用机制？ 3-甲基-5-羟基-1H-吲唑是一种常用的医药中间体，具有广泛的应用前景。据文献报道，它可以用于制备抑制αv整联蛋白的化合物，以及调节M4毒蕈碱乙酰胆碱受体的变构。这些应用对于治疗与这些蛋白质异常相关的疾病具有重要意义。抑制αv整联蛋白的应用根据CN201780082125.5的报道，3-甲基-5-羟基-1H-吲唑可以用于制备一类具有特定结构的吲唑衍生物。这些化合物被用于治疗与含有αV整联蛋白调节异常相关的疾病、障碍或病症。αV整联蛋白是一类参与细胞与细胞外基质相互作用的重要蛋白质，对于细胞迁移、增殖、存活和组织完整性的维持起着关键作用。这些化合物的研究有望为纤维化和癌症等病理学病症的治疗提供新的方向。调节M4毒蕈碱乙酰胆碱受体的应用 3-甲基-5-羟基-1H-吲唑还可以用于制备一类具有特定结构的M4毒蕈碱乙酰胆碱受体变构调节剂。M4被认为是调节精神障碍中毒蕈碱型乙酰胆碱受体异常的最可能的亚型。乙酰胆碱受体是一类与G蛋白偶联的受体，包括M1-M5五种亚型。这些化合物的研究有助于深入理解精神分裂症、认知障碍和神经性疼痛等疾病的发病机制。参考文献 [1] [中国发明] CN201780082125.5 作为αv整联蛋白拮抗剂的吲唑衍生物 [2] From PCT Int. Appl., 2017112719, 29 Jun 2017 查看更多

#3-甲基-5-羟基-1H-吲唑

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什么是γ-氨基丁酸（GABA）? γ-氨基丁酸是一种非蛋白质氨基酸，广泛存在于高等植物中，尤其是大叶种茶树中。它以高浓度存在，并超过了许多蛋白质氨基酸。自上世纪六十年代以来，对GABA的研究逐渐增多，至上世纪九十年代达到高峰，取得了许多研究论文和成果。 γ-氨基丁酸是一种四碳非蛋白质氨基酸，也被称为氨酪酸。它在生物界广泛分布，并参与生物体的多种代谢活动。γ-氨基丁酸通常以小叶状结晶或针状晶体的形式存在，具有熔点202℃。它易溶于水，微溶于热乙醇，不溶于其他有机溶剂。生理功能及作用 1. GABA具有抗焦虑的作用。它是中枢神经系统的抑制性传递物质之一，能够降低神经元活性，防止神经细胞过热。GABA能够结合抗焦虑的脑受体并激活它们，与其他物质协同作用，抵制与焦虑相关的信息传递到脑指示中枢。 2. GABA能够降低血压。它作用于脊髓的血管运动中枢，促进血管扩张，从而降低血压。研究表明，GABA及其A、B两个受体均能有效促进血管扩张。 3. GABA参与镇痛作用。它通过GABA受体介导，抑制神经元活动，发挥镇痛作用，对伤害信息处理和疼痛调节起到调节作用。 4. GABA具有神经营养作用。最近的研究发现，GABA在神经系统发育过程中具有潜在的营养因子作用，能够调节神经元的增殖和分化。 5. GABA还具有其他作用，包括对肾功能和肝功能的影响，促进酒精代谢和消臭效果，以及对心律和激素的调节作用等。常见使用方法 1. GABA可应用于食品中，如饮料、可可制品、巧克力和巧克力制品、糖果、焙烤食品、膨化食品等，但不包括婴幼儿食品。 2. GABA也可用作保健食品。 3. GABA作为药品可用于治疗各种类型的肝性脑病和尿毒症，也可用作催眠药及煤气中毒等引起的昏迷的苏醒剂。此外，口服GABA还可用于脑血管障碍引起的偏瘫、记忆障碍、语言障碍、儿童智力发育迟缓及神经幼稚症等。推荐摄入量根据我国卫生部的规定，每日使用量应控制在＜500mg。其他相关文件尚未发现有效规定。注意事项和禁忌不适宜使用GABA的人群包括孕妇、乳母以及婴幼儿，因为GABA可以通过血脑屏障。尚未发现GABA的禁忌情况。在使用GABA时，必须充分稀释后缓慢静滴，以免引起血压急剧下降导致休克。如果在静滴过程中出现胸闷、气急、头昏、恶心等症状，应立即停药。可能出现的不良反应包括运动失调、肌无力、血压降低、呼吸抑制等。 2009年，我国批准将GABA作为新资源食品，允许应用于饮料、可可制品、巧克力和巧克力制品、糖果、焙烤食品、膨化食品中，但不包括婴幼儿食品。规定每日使用量＜500mg。查看更多

#γ-氨基丁酸

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异烟肼是什么药物? 简介异烟肼是一种无色结晶或白色至类白色的结晶性粉末，没有臭味，微甜后苦味，遇光会发生变质。它在水中易溶，在乙醇中微溶，在乙醚中几乎不溶解。它的熔点在170～173℃之间。异烟肼是在1952年发明的，它的出现彻底改变了结核病的治疗方式。尽管在近50年的使用历史中，一些患者感染的结核菌已经产生了耐药性，但大多数医生仍然认为它是治疗结核病不可或缺的主要药物。它与利福平、乙胺丁醇、链霉素和吡嗪酰胺一起被称为一线抗结核药物。根据世界卫生组织国际癌症研究机构于2017年10月27日公布的致癌物清单初步整理参考，异烟肼被列入了3类致癌物清单中。基本信息药品名称：异烟肼别名：异烟酰肼，雷米封，4-吡啶甲酰肼外文名称：Isonicotinicacidhydrazide;Isoniazid 是否处方药：处方药主要适用症：生化研究、各型肺结核制药主要用药禁忌：癫痫、精神病、肝功能不良者慎用是否纳入医保：纳入分子式：C6H7N3O 分子量：137.15 等级：BR CAS号：54-85-3 EINECS号：200-214-6 熔点：170~173℃ 禁忌症 1.服用异烟肼时每日饮酒，易引起该药物诱发的肝脏毒性反应，并加速药物的代谢。因此，需要调整药物的剂量，并密切观察肝毒性征象。患者应避免在服药期间饮酒。 2.肝功能不良者、有精神病和癫痫病史者慎用。 3.孕妇慎用。异烟肼可以穿过胎盘，导致胎儿血药浓度高于母血药浓度。动物实验证实异烟肼可能导致死胎，但在人类中尚未证实，因此孕妇在使用时必须权衡利弊。异烟肼与其他药物联合使用时对胎儿的影响尚未明确。此外，在给新生儿使用该药物时应密切观察不良反应。 4.抗酸药物，尤其是氢氧化铝，可以抑制异烟肼的吸收，因此不宜与其同时服用。查看更多

#异烟肼

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1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的应用及制备方法？ 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，化学式为C8H17N3·HCl，是一种白色结晶粉末，具有极强的吸湿性。它在水中的溶解度超过20g/100ml，可溶于乙醇，熔点为110-114℃。该化合物常用作羧基的活化试剂，也可用于活化磷酸酯基团、蛋白质与核酸的交联以及免疫偶联物的制备。它通常与N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)或N-羟基硫代琥珀酰亚胺联用，以提高偶联效率。使用时的pH范围为4.0-6.0。 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的结构式该化合物的应用领域和市场前景 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐具有广阔的应用领域和较好的市场前景。它可用于酰胺合成中作为羧基的活化试剂，也可用于活化磷酸酯基团、蛋白质与核酸的交联以及免疫偶联物的制备。然而，由于该化合物极易吸湿，吸湿后熔点降低，导致偶联效果较差。因此，提高1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的熔点具有重要意义，也为其应用领域带来了更多可能性。制备1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的方法制备1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的方法如下：首先，在二硫化碳中加入N,N'-二甲基丙二胺，控制温度在10-15℃，滴加过程中会生成白色固体。滴加完毕后保温1小时，过滤并用甲醇洗涤，得到中间体1。然后，将中间体1与氯仿、三乙胺和氯甲酸乙酯反应，控制温度在10-15℃，滴加完毕后保温1小时，过滤并干燥，得到中间体2。最后，将中间体2与乙胺反应，滴加完毕后保温1小时，用碱液洗涤有机相，干燥后减压浓缩，得到油状物。在25℃下，使用10%浓度的次氯酸钠进行氧化，萃取分层后减压浓缩，溶剂蒸干后，经减压精馏得到纯度为99.2%的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。主要参考资料 [1] 张育川. (2001). 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐. 精细与专用化学品(Z1), 25-26. [2] 刘刚, 易雪静, 邓兰青, & 徐中海. (2018). N,n-烃基-2-甲胺烃基酰胺的合成. 合成化学, v.26;No.156(02), 34-39. [3] 谭慧姗. (2011). 磁化多壁碳纳米管固定脂肪酶拆分α-苯基乙醇的研究. (Doctoral dissertation, 北京化工大学). 查看更多

#1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐

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国产食盐中的亚铁氰化钾是否有毒? 朋友圈和微信群经常有人发这样的消息：国产食盐中含有亚铁氰化钾，有剧毒不能吃。上网一查，这都是3年前的老谣言了，已经被辟谣过很多次了。不知道为啥最近又被人提起，搞得好多人买盐的时候看到亚铁氰化钾都不敢下手了。图：来源网络亚铁氰化钾真的有毒吗？有它的食盐能吃不？看来很有必要说一下了。 1.亚铁氰化钾是什么？合法的抗结剂亚铁氰化钾是我国允许添加在食品中的一种食品添加剂，可以起到抗结剂的作用。加入它的目的在于提高食盐的稳定性和感官特性，也更加便于运输和贮存。[1] 图：《食品添加剂使用标准》.亚铁氰化钾因为，有的食盐矿物含量较高，容易结块，亚铁氰化钾作为一种抗结剂，添加到食盐中之后可以防止食盐因矿物质高或因水份含量高而结块。只要添加的亚铁氰化钾是在允许使用量的安全范围内，就不用担心会对身体造成伤害。还是那句话：任何抛开剂量只谈毒性的行为都是不靠谱的！ 2.亚铁氰化钾有毒吗？正常烹调没毒国家卫健委表示：亚铁氰化钾中的铁和氰化物之间结构稳定，只有在高于400℃的环境下才可能分解产生氰化钾；但日常烹调温度通常低于340℃，因此在烹调温度下亚铁氰化钾分解的可能性极小。所以，只要是正常炒菜烹调，并不用担心产生有毒的氰化钾。另外，从剂量上来讲：亚铁氰化钾的ADI（每日允许摄入量）为：0～0.025mg/kg bw[2]，以一个60kg的成年人计算，每日最大允许摄入量为1.5mg。根据《中国居民膳食指南》的推荐，每天食盐摄入量为6g[3]。如果按照《食品添加剂使用标准》中最大使用量0.01g/kg来计算每日亚铁氰化钾摄入量，则最多为0.06mg/d，远低于60kg成年人每日最大允许摄入量1.5mg/d。所以，日常工作生活中完全不用担心亚铁氰化钾的毒性问题。 3.选食盐真正应该关注什么？买盐选盐要把目光从亚铁氰化钾的身上移开，多关注下面这3点： ①是否含碘：对于碘缺乏的地区和人群，要选择含碘盐，而对于甲状腺疾病患者或者其它需要少碘饮食的人群，就选择不含碘的无碘盐。 ②是否低钠：对于需要低钠饮食的高血压人群和其他需要低钠饮食的人群，可以选择低钠盐。同时需要注意钾含量，一般来说低钠盐普遍钾含量较高。 ③没必要选择：目前市面上还有一些强化了其他营养素的盐，比如“加钙盐”、“加锌盐”、“加铁盐”等，这类盐并不推荐大家购买。虽然有强化营养素，但是每天建议摄入量还是6g以下，也补充不了多少营养。比如下图这款加钙盐，按照每日6g食盐计算，也就能摄入7.5g的钙，仅为每日钙需要量800mg/g的0.9%而已。[3] 图：某品牌加钙盐的营养成分表总结一下：食盐中含有亚铁氰化钾是很正常的，正常烹调使用也不会产生毒性。提醒大家控制好食盐摄入量。高盐饮食危害大，不仅会增加高血压的发病风险，也是诱发胃癌的主要因素之一，每人每天食盐摄入量别超过1啤酒瓶瓶盖（＜6g）。参考文献： [1].GB 2760-2014 食品安全国家标准食品添加剂使用标准 http://down.foodmate.net/standard/yulan.php?itemid=42543 [2].刘钟栋．食品添加剂：东南大学出版社，2006：191 [3].中国营养学会.中国居民膳食指南[M].人民卫生出版社，2016 查看更多

#亚铁氰化钾

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氯羟吡啶是什么? 氯羟吡啶是一种具有广泛抗球虫作用的化合物，也被称为二氯二甲吡啶酚或克球酚。它是一种白色或类白色粉末，在甲醇或乙醇中微溶，在水、丙酮、乙醚、苯中不溶。主要用于禽类和兔子球虫病的防治。氯羟吡啶的作用机制氯羟吡啶对球虫的作用是抑制其发育，同时也对机体免疫力有抑制效应。因此，使用氯羟吡啶时需要连续应用，不能贸然停药。各国已规定并不断修订动物组织中氯羟吡啶残留的最高限量标准，禽肉组织中的残留量为5μg/kg，禽肝脏中的残留量为15μg/kg。在食品安全检测体系中，标准样品对整个检测质量控制体系起到核心作用。建立兽药残留量的分析方法需要进行三种类型的样品测试：受控组织或液体样品、用药物强化至或接近最大容许水平的样品以及本身具有药物残留的组织样品。这样可以保证分析方法具有一定的样品基质适用范围和重复性。欧盟的法规(2002/657/EC)明确指出，在兽药残留检测中需要采用实物标准样品进行检测过程控制，可见实物标准样品在兽药残留检测中具有重要意义。制备鸡肉中氯羟吡啶标准样品的方法一种制备鸡肉中氯羟吡啶标准样品的方法被公开。该方法包括以下步骤： A) 选择活鸡，人工饲喂含有氯羟吡啶的饲料，使鸡体内含有氯羟吡啶； B) 给药结束后，宰杀、取鸡肌肉，搅碎，混匀制成肉糜，均质、真空冷冻干燥得到粗样； C) 研磨步骤B所述粗样，过筛，得到鸡肉冻干粉标准样品； D) 封装所述标准样品，冷藏保存； E) 检验所述标准样品的均匀性和稳定性； F) 对所述标准样品中的氯羟吡啶含量进行定值。该方法解决了目标物和基体结合情形与真实检测样品不完全一致而导致提取、净化等处理结果与日常分析样本存在较大差异的问题。标准样品为实物标准样品，均匀稳定，无防腐剂及抗氧化剂，易保存。它可用于氯羟吡啶类药物残留测试项目的能力验证、检测方法的验证、测试仪器的校准以及测试结果的质量控制与考核。查看更多

#氯羟吡啶

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为什么N,N-二乙基甲酰胺在有机合成中被广泛应用? N,N-二乙基甲酰胺是一种无色透明液体，在常温常压下具有类似于N,N-二甲基甲酰胺（DMF）的物理化学性质，并且可以与水和常见的有机溶剂混溶。它对常见的酸和碱具有良好的化学稳定性，但是由于含有一个醛基基团，它可以与具有强亲核性的格式试剂发生亲核加成反应。因此，N,N-二乙基甲酰胺在有机合成化学中被广泛用作有机溶剂，特别适用于基础有机化学研究。性质和溶解性 N,N-二乙基甲酰胺是一种强极性有机化合物，可以溶解于多种极性溶剂，如水、醇、酮和酯等。它的溶解度随着溶剂极性的增加而增加。这是由于该化合物分子中含有极性基团和较长的碳链，这些基团之间的相互作用力较强，导致N,N-二乙基甲酰胺的沸点较高。在有机合成中的应用 N,N-二乙基甲酰胺不仅可以用作有机化学反应中的有机溶剂，还可以作为有机合成中间体和催化物种。由于其高极性，它可以促进反应物之间的有效碰撞和化学反应几率，从而提高反应速率和产率。例如，N,N-二乙基甲酰胺可以用作催化酯化反应和羧酸衍生物合成的合成。图1展示了N,N-二乙基甲酰胺合成亚胺类化合物的示意图。图1 N,N-二乙基甲酰胺合成亚胺类化合物在一项有机合成实验中，将Zn(OTf) 2 (0.02mmol)、N,N-二乙基甲酰胺 (0.2mmol)和对甲苯磺酰胺 (0.2mmol)加入到一个干燥的20mL试管中，所得的反应混合物在室温下搅拌，然后通过注射器向反应混合物中加入环己烷（1.0 mL）、重氮乙酸乙酯（0.4 mmol）。将所得的反应混合物转移至90 ℃的油浴中，并将其在空气氛围下加热搅拌反应12个小时。反应结束后，将反应混合物冷却至室温，然后直接将其在减压下进行浓缩以除去反应溶剂。所得的残余物通过硅胶柱色谱法进行分离纯化（使用石油醚/乙酸乙酯=2:1），即可得到产物。参考文献 [1] Chen, Jijun; et al Chemical Communications (2017), 53(99), 13256-13259. [2] Frindy, Sana; El Kadib, Abdelkrim; ChemistrySelect (2016), 1(2), 157-162. 查看更多

#N,N-二乙基甲酰胺

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氢化肉桂酰氯的特性及应用？氢化肉桂酰氯是一种黄色液体，具有较强的吸湿性，易潮解变质。它属于烷基酰氯类化合物，可与多种亲核试剂发生缩合反应，生成酯衍生物和酰胺类化合物。理化性质氢化肉桂酰氯对水和醇类化合物敏感，含有酰氯单元，可从羧酸衍生物制备。反应时需使用干燥的溶剂和试剂，并在干燥环境中进行，以避免副反应或分解。此外，由于其有毒性，应在安全操作规程下进行。应用图1 氢化肉桂酰氯的酯化反应在干燥的反应烧瓶中，将吡啶、氢化肉桂酰氯、(S)-N-叔丁基-2-羟基-3-甲基丁硫酰胺和DMAP的氯仿溶液加入，室温下搅拌反应，蒸发后通过硅胶柱色谱分离纯化得到目标产物。储存条件由于氢化肉桂酰氯吸湿性强且对水和醇类化合物敏感，需在干燥条件下保存，避免与湿气或其他含水或醇类物质接触。添加干燥剂如无水氯化钙或硅胶有助于吸附湿气，保持化合物干燥。参考文献 [1] Wang, Yinli; et al ACS Catalysis (2022), 12(10), 6100-6107. 查看更多

#3-苯基丙酰氯

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