普通肉汤琼脂培养基的用途和制备方法? 普通肉汤琼脂培养基是一种常用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养的培养基,同时也可用于消毒效果测定。 营养琼脂是一种含有蛋白胨、牛肉膏粉、氯化钠和琼脂的培养基,其中蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源,氯化钠能维持均衡的渗透压,琼脂则是培养基的凝固剂。 制备营养琼脂的配方为每升蛋白胨10g、牛肉膏粉3g、氯化钠5g、琼脂15g,最终pH值为7.3±0.2。 营养琼脂的使用方法如下: 1、称取33g的营养琼脂,加入1L的蒸馏水或去离子水,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装到三角瓶中,进行121℃高压灭菌15分钟。 2、取25克(或25mL)检样放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中,加入适量的玻璃珠,充分振摇,制备1:10的均匀稀释液。然后依次制备1:100、1:1000等稀释液。 3、根据样品污染情况的估计,选择2-3个合适的稀释度,在每个稀释度中吸取1mL稀释液于灭菌平皿中,每个稀释度做2个平皿。 4、将稀释液移入平皿后,将凉至46℃左右的营养琼脂培养基倒入平皿中,约15mL,并转动平皿使混合均匀。同时,在加有1mL稀释液的灭菌平皿中倒入营养琼脂培养基作为空白对照。待琼脂凝固后,倒置于36±1℃温箱中培养48±2小时。 5、观察结果并进行菌落计数。 6、菌落计数时可用肉眼观察,必要时使用放大镜检查,以防遗漏。在计算各平板的菌落数后,求出同一稀释度的各平板平均菌落总数。 营养琼脂的应用 肥胖与胃食管反流病的关系及肥胖大鼠食管下段菌群及乳杆菌种的变化的研究 通过细菌培养、变性梯度凝胶电泳(DGGE)及测序的方法,研究发现高脂饮食诱导的肥胖可能会影响食管下段的菌群组成。 研究方法如下: 1. 首先建立高脂饮食诱导的肥胖大鼠模型,将20只SD大鼠适应性喂养1周后,随机分为高脂饮食组和正常饮食对照组,每组10只。在7周末处死大鼠,并通过体重变化、Lee's指数、血清甘油三酯和总胆固醇的检测来评估高脂饮食大鼠的肥胖程度。 2. 通过选择性培养基分析正常饮食和高脂饮食诱导下两组SD大鼠食管下段粘膜可培养细菌的组成和菌群计数变化。不同类型的细菌使用不同的培养基进行分析。 3. 利用分子生物学方法分析乳杆菌种的变化,提取SD大鼠食管下段粘膜可培养乳杆菌的DNA,通过引物扩增16SrDNA产物,使用变性梯度凝胶电泳(DGGE)分离16SrDNA产物,然后对凝胶中的单独条带进行扩增纯化并测序,最后通过与GenBank数据库进行比对分析。 参考文献 [1] Development of gut microflora in obese and lean rats[J]. Folia Microbiologica. 2010(4) [2] Inflammation and Intestinal Metaplasia of the Distal Esophagus Are Associated With Alterations in the Microbiome[J]. Liying Yang, Xiaohua Lu, Carlos W. Nossa, Fritz Francois, Richard M. Peek, Zhiheng Pei. Gastroenterology. 2009(2) [3] Gastroesophageal Reflux Disease (GERD): Risk Factors, and Impact on Quality of Life - A Population-based Study[J]. Guy D. Eslick, Nicholas J. Talley. Journal of Clinical Gastroenterology. 2009(2) [4] Dysfunction of the lower esophageal sphincter and dysmotility of the tubular esophagus in morbidly obese patients[J]. Obesity Surgery. 2009(8) [5] 赵鑫. 肥胖与胃食管反流病的关系及肥胖大鼠食管下段菌群及乳杆菌种的变化的研究[D]. 中南大学, 2011. 查看更多
5'-腺嘌呤核苷酸二钠盐的特性及应用? 5'-腺嘌呤核苷酸二钠盐是一种广泛分布于自然界的核苷酸,常温常压下为白色固体粉末。它是一种腺苷酸衍生物,具有重要的生物学功能,参与了生物体内几乎所有的生物化学反应过程。5'-腺嘌呤核苷酸二钠盐可用作生物化学合成和医药化学中间体以及食品添加剂。 图1 5'-腺嘌呤核苷酸二钠盐的化学结构式 溶解性 5'-腺嘌呤核苷酸二钠盐易溶于水、甲醇和二甲基亚砜,但在低极性的有机溶剂中溶解性差,不溶于非极性有机溶剂。因此,在制备过程中常用乙醚或正己烷洗涤以纯化5'-腺嘌呤核苷酸二钠盐。 用途 5'-腺嘌呤核苷酸二钠盐是一种腺嘌呤钠盐形式,可用于肿瘤化疗、放疗、苯类化学品中毒等引起的白细胞减少症。核苷酸类物质在医疗上具有广泛应用,如ATP、GTP、5′-核苷酸等可作为辅助药物。在食品工业上,5'-腺嘌呤核苷酸二钠盐可用作食品添加剂,例如助鲜剂。此外,在生物学研究中,5'-腺嘌呤核苷酸二钠盐也是一种必不可少的生化试剂。 生物活性 5'-腺嘌呤核苷酸二钠盐可参与细胞能量转移的反应,充当AMP激活的蛋白激酶(AMPK)的激活剂,用作AMP-胸苷激酶、AMP脱氨酶和5'-核苷酸酶等酶的底物。 储存条件 5'-腺嘌呤核苷酸二钠盐是一种生物化学试剂,具有较强的吸湿性,对空气和水比较敏感。因此,它需要密封保存在低温(一般为-20度冰箱)且干燥的环境中,最好保存在惰性气体保护的容器中。 参考文献 [1] New strategies in prostate cancer: targeting lipogenic pathways and the energy sensor AMPK. Clin. Cancer Res. 16 , 3322-3328, (2010) [2] 5′-AMP-activated protein kinase is inactivated by adrenergic signalling in adult cardiac myocytes. Tsuchiya Y, Denison FC, et al. Biosci. Rep. 32(2) , 197-213, (2011) 查看更多