周期素依赖性激酶4的检测方法及其在乳腺癌中的作用? 背景信息 周期素依赖性激酶4(CDK-4)ELISA KIT是一种用于测定标本中CDK-4水平的双抗体夹心法。该方法利用纯化的CDK-4抗体包被微孔板,形成固相抗体。然后,将CDK-4样品加入微孔中,与HRP标记的CDK-4抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后,加入底物TMB进行显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,最终转化成黄色。颜色的深浅与样品中的CDK-4浓度呈正相关。通过酶标仪测定450nm波长下的吸光度(OD值),可以计算出样品中CDK-4的浓度。 周期素依赖性激酶(CDKs)是一类蛋白质激酶家族,最早是因其在细胞周期调控中的作用而被发现。除了参与细胞周期调控外,CDKs还涉及转录调控、mRNA加工和神经细胞分化等过程。细胞周期失控是癌症的一个标志性特征,CDK4和CDK6是细胞周期的关键调节因子。在许多细胞中,CDK4/6过度活跃,导致细胞增殖失控。在雌激素受体阳性乳腺癌中,CDK4/6的过度活跃也非常常见。 CDKs是一类在已知所有真核生物中存在的酶,其在细胞周期调控中的作用非常保守。实际上,将人类的同源基因替换酵母细胞中的CDK基因后,酵母细胞仍然可以正常生长和分裂。CDK是相对较小的蛋白,分子量在34到40千道尔顿之间,包含多个激酶结构域。 应用领域 周期素依赖性激酶4在乳腺癌细胞侵袭转移中的作用研究 周期素依赖性激酶4(Cdk4)是丝氨酸/苏氨酸激酶家族的成员,与周期蛋白D(Cyclin D)结合形成复合物,推进细胞周期G1期的进程。大量研究表明,Cdk4在肿瘤发生中起着重要作用。然而,Cdk4在恶性肿瘤转移中的作用及其作用机制尚不清楚。本研究以乳腺癌细胞系为模型,探究Cdk4在肿瘤转移中的作用。通过Cdk4 RNA抑制和Cdk4过表达的方法,构建了Cdk4抑制和过表达的乳腺癌细胞系。划痕实验和Transwell实验的结果显示,抑制Cdk4表达后,乳腺癌细胞的侵袭转移能力明显降低;而过表达Cdk4后,乳腺癌细胞的侵袭转移能力明显增强。 此外,体内实验的结果也进一步证明了上述发现。同种移植模型和异种移植模型都显示,Cdk4抑制后,小鼠肺转移的发生时间较晚,转移灶数量减少。这些结果表明,Cdk4促进乳腺癌细胞的侵袭转移。通过基因芯片技术和Real-time PCR技术检测了Cdk4抑制和过表达前后一系列与细胞侵袭转移相关因子的表达变化。结果显示,Cdk4促进这些因子的表达。这提示Cdk4通过调控与肿瘤侵袭转移相关的因子来促进乳腺癌细胞的侵袭转移。本研究揭示了Cdk4在肿瘤侵袭转移中的重要作用,并进一步探索了Cdk4在乳腺癌细胞侵袭转移过程中的作用机制,为基于Cdk4的乳腺癌治疗提供了新的理论基础和依据。 参考文献 [1] Gene Hypermethylation in Multiple Myeloma: Lessons from a Cancer Pathway Approach[J]. Chor S. Chim, Yok L. Kwong, Raymond Liang. Clinical Lymphoma & Myeloma. 2008(6) [2] The Impact of Transgenic IGF-IR Overexpression on Mammary Development and Tumorigenesis[J]. Robert A. Jones, Roger A. Moorehead. Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 2008(4) [3] Switching cyclin D-Cdk4 kinase activity on and off[J]. Stacy Blain. Cell Cycle. 2008(7) [4] Gene profile analysis of colorectal cancer cell lines by cDNA macroarray[J]. Noboru Saito, Shingo Kameoka, Ryuji Furukawa. Oncology Reports. 2007(5) [5] 谢晋鹤. 细胞周期依赖性激酶4在乳腺癌细胞侵袭转移中的作用[D]. 首都师范大学, 2009. 查看更多
四乙二醇二甲醚的特性和合成方法有哪些? 四乙二醇二甲醚的特性和合成方法 四乙二醇二甲醚是一种稳定的溶剂,广泛应用于化学工业领域。它不仅可以作为气体吸附剂、添加剂、清洗剂和催化剂,还可以用作许多药物合成的中间体或产物。近年来,我国逐步成为全球最大的四乙二醇二甲醚生产基地,对其清洁生产工艺技术提出了更高要求。 四乙二醇二甲醚的特性 由于四乙二醇二甲醚的特殊结构,它具有亲水和亲油的特性。与普通的非离子表面活性剂相比,它具有传质速度快、分相时间短等优点。因此,它可以替代非离子表面活性剂,克服了非离子表面活性剂在水溶液中粘度大、不易分相的缺点。 四乙二醇二甲醚的合成方法 将聚乙二醇、碘化甲酯和氢氧化钾按一定比例混合,并在适当条件下反应得到四乙二醇二甲醚。合成路线如图1所示。 甲基醚化反应在高压釜中进行,通过加入二甘醇单甲醚和固体催化剂,在适当条件下反应得到四乙二醇二甲醚。合成路线如图2所示。 参考文献 [1]任春梅.四乙二醇二甲醚合成工艺研究进展及绿色生产工艺设计[J].精细石油化工进展,2019,20(03):21-24+33.DOI:10.13534/j.cnki.32-1601/te.2019.03.007. [2]Oberendfellner, Gabriele; et al. Production of alkylene glycol diethers using Lewis acid mixture as catalyst. World Intellectual Property Organization, WO2007017026 A1 2007-02-15. 查看更多