高通量基因编辑技术如何提高基因编辑效率和准确性? 高通量基因编辑技术是一种帮助人们实现“编辑生命”愿望的新方法。传统的基因编辑技术存在局限性,只能在一个反应中操作一个或数个基因,并且可能会在基因组中留下不需要的序列修改。这种常规的基因编辑方法无法满足大规模研究中对多种基因的编辑需求。而高通量基因编辑技术可以同时编辑数百种基因。 一种新的高通量基因编辑方法:guide+donor 哈佛大学George Church教授领导的研究团队开发了一种基于CRISPR-Cas9的新型高通量基因编辑方法:guide+donor。这种方法可以在单个酿酒酵母中同时精确改变数百个不同基因,编辑效率高达80%至100%。此外,该方法还可以选择特定行为细胞,在生物体内进行定向基因编辑和修复。guide+donor不仅可以帮助构建大型文库,还可以进行基因功能分析,发现未知的基因突变和功能。 新的高通量基因编辑方法不仅在酵母中进行高效的“功能基因组学”研究,还可以模拟和检测酵母细胞中与特定性状或功能紊乱相关的低频基因突变,并找出与疾病相关的基因。此外,该方法还可以挖掘新的基因和功能,并研究基因组中的非编码序列,提高对基因调控和染色体生物学的理解。 该高通量基因编辑方法的技术优势包括:在一个反应中快速构建大型DNA变异文库;在一个反应中同时提供guide和donor,防止无效修复和非生产性修复;含有guide+donor组合的质粒可以作为追踪基因编辑细胞的独特条形码,利用NGS技术可以进行高通量分子表型鉴定。 主要参考资料 [1] High-throughput creation and functional profiling of DNA sequence variant libraries using CRISPR–Cas9 in yeast 查看更多