人真皮微血管内皮细胞的提取及应用? 背景信息 人真皮微血管内皮细胞是从人真皮组织中提取的细胞,经过验证不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。皮肤血管主要由内皮细胞构成,这些细胞不仅起到血管内外分界的作用,还是物质扩散的选择性屏障。内皮细胞在不同的时间和空间表现出不同的结构和功能变化,通过增殖、休眠、凋亡和老化来维持和重塑皮肤微血管。 细胞培养步骤 为了提取和培养人真皮微血管内皮细胞,需要准备培养基和培养冻存条件。培养液使用内皮细胞培养基,培养条件为空气95%、二氧化碳5%、温度37摄氏度,湿度70%-80%。冻存液为90%FBS+10%DMSO,储存在液氮中。 细胞处理包括细胞复苏和细胞传代。细胞复苏时,将冻存管中的细胞悬液在37摄氏度水浴中解冻,加入培养基后离心,然后将细胞悬液加入培养瓶或皿中培养过夜。细胞传代时,当细胞密度达到80%-90%时进行传代培养。 应用领域 用于人真皮微血管内皮细胞的提取及其低氧后处理模型的建立 通过酶消化和磁珠分选的方法提取人皮瓣微血管内皮细胞,并建立低氧后处理模型。通过细胞学鉴定、乳酸脱氢酶检测、Tunel法染色和Western Blot方法检测相关蛋白的表达,研究低氧后处理对细胞的影响。 参考文献 [1]Comparing Different Postconditioning Cycles After Ischemia Reperfusion Injury in the Rat Skin Flap[J].O.Koray Coskunfirat,An Cinpolat,Gamze Bektas,Onur Ogan,Temmuz Taner.Annals of Plastic Surgery.2014(1) [2]Involvement of the FoxO3a pathway in the ischemia/reperfusion injury of cardiac microvascular endothelial cells[J].Xu-Feng Qi,Yun-Jian Li,Zhuo-Ying Chen,Soo-Ki Kim,Kyu-Jae Lee,Dong-Qing Cai.Experimental and Molecular Pathology.2013(2) [3]An in vitro model of warm hypoxia–reoxygenation injury in human liver endothelial cells[J].Neal R.Banga,K.Raj Prasad,J.Lance Burn,Shervanthi Homer-Vanniasinkam,Anne Graham.Journal of Surgical Research.2012(1) [4]Quantitative histological assessment of hepatic ischemia-reperfusion injuries following ischemic pre-and post-conditioning in the rat liver[J].Journal of Surgical Research.2012 [5]鲁昆.人真皮微血管内皮细胞的提取及其低氧后处理模型的建立[D].南华大学,2015. 查看更多