人2-硫代噻唑烷-4-羧酸(TTCA)ELISA试剂盒的应用及操作流程? 背景 [1-3] 人2-硫代噻唑烷-4-羧酸(TTCA)ELISA试剂盒用于测定人血清、血浆、组织等样本中2-硫代噻唑烷-4-羧酸(TTCA)的含量。 原理:利用纯化的人2-硫代噻唑烷-4-羧酸(TTCA)捕获抗体包被微孔板,制成固相抗体。然后在包被的微孔中依次加入人2-硫代噻唑烷-4-羧酸(TTCA),再与HRP标记的检测抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过彻底洗涤后加入底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的人2-硫代噻唑烷-4-羧酸(TTCA)呈正相关。最后,使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人2-硫代噻唑烷-4-羧酸(TTCA)的含量。 人2-硫代噻唑烷-4-羧酸(TTCA)ELISA试剂盒 操作流程: 1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。 2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。 3. 样本孔中加入待测样本50μL,空白孔不加。 4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。 5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。 6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。 7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。 应用 [4][5] 用于二硫化碳接触工人尿2-硫代噻唑烷-4-羧酸排泄规律的研究 二硫化碳(CS2)是广泛应用于轻纺、化工及制药工业的原料和有机溶剂,也是实验室常用溶剂。CS2的心血管毒性自二次世界大战以采已积累了不少证据,长期接触可导致作业工人冠心病的发病率与死亡率增高。但是,因CS2体内代谢过程的复杂性和研究手段的滞后,其损害机理迄今尚未完全阐明。 近年来,在老年性动脉硬化疾病研究中,自由基清除功能改变与发病的关系备受关注。动物实验与流行病学调查结果表明,CS2所致心血管病变与老年性动脉硬化性疾病相似;动物实验结果表明,CS2染毒动物血清、主动脉和心肌中过氧化脂质(LPO)含量比对照组明显增加,提示CS2是一个重要的致脂质过氧化物。 探讨二硫化碳(CS2)接触工人尿2硫代噻唑烷4羧酸(TTCA)的排泄规律,为制定CS2短时接触生物监测提供实验依据。方法将受试对象分为3组进行实验:(1)14名非CS2接触者在某CS2车间暴露2h后收集不同时段尿液,分析其TTCA浓度变化;(2)某CS2车间15名CS2接触工人三班倒休息4 8h后上班,连续收集3d班前、班中、班末尿,分析其TTCA浓度变化;(3)收集4 0名长期接触CS2工人班末尿,分析其TTCA浓度变化与工人接触CS2的8h时间加权平均浓度(PC TWA)的关系。 参考文献 [1]Occupational exposure to low concentrations of carbon disulfide as a risk factor for hypercholesterolaemia[J].K.Kotseva.International Archives of Occupational and Environmental Health.2000(1) [2]Antioxidative stress response in workers exposed to carbon disulfide[J].Le Jian,Disheng Hu.International Archives of Occupational and Environmental Health.2000(7) [3]Hepatic cholesterol metabolism following exposure to carbon disulfide in phenobarbital-treated rats[J].J.E.Simmons,R.A.Sloane,E.W.Stee.Archives of Environmental Contamination and Toxicology.1989(5) [4]Experimental human exposure to carbon disulfide[J].J.Rosier,H.Veulemans,R.Masschelein,M.Vanhoorne,C.Peteghem.International Archives of Occupational and Environmental Health.1987(3) [5]简乐.CS_2体内外氧化应激及其对生物靶分子损伤机理的研究[D].浙江大学,2002. 查看更多