SW 1353人软骨肉瘤细胞的来源和应用? 背景 [1-3] SW 1353人软骨肉瘤细胞最初是从一位72岁女性白人的右肱骨原发性Ⅱ级软骨肉瘤中分离得到的。细胞最初的培养基是含有可的松和胰岛素的L-15培养基,添加了10%FBS和1%抗生素。1982年1月,ATCC收到了传代至12代的冻存管SW 1353细胞。 软骨肉瘤是一种常见的恶性骨肿瘤,可发生于髓腔或骨膜,也有少数发生于软组织。该肿瘤常见于四肢长骨和骨盆,也可见于椎骨、骶骨、锁骨、肩胛骨和足骨。SW1353软骨细胞系是一种人软骨肉瘤细胞株,广泛应用于软骨细胞功能及相关疾病的研究。 SW 1353人软骨肉瘤细胞 细胞处理方法: 1.细胞在培养瓶中培养至状态良好后,灌满培养基进行运输。获得细胞后,用酒精棉球擦拭瓶口进行消毒,然后在超净台中进行操作。 2.当细胞生长至70%-80%时,将瓶中的培养基移入无菌瓶中留作培养使用,保留5-8mL培养基在37℃、5%的CO2温箱中继续培养。当细胞培养至90%-100%时,按要求进行消化传代。 3.弃去培养基,用无菌PBS或其他缓冲液清洗细胞2次,加入适量胰蛋白酶消化(EDTA胰酶),待细胞完全脱壁后加入培养基吹打混匀,进行分瓶培养。 应用 [4][5] 人软骨肉瘤细胞SW1353及WISP3突变型C20/A4软骨细胞的Ⅱ型胶原动力学及定位研究 与许多组织细胞不同,软骨细胞在体外长期贴壁培养(单层培养)和传代过程中,细胞形态和功能会发生显著变化。细胞逐渐丧失合成Ⅱ型胶原和硫酸软骨素蛋白多糖的能力,转而分泌Ⅰ型和Ⅲ型胶原,这种变化被称为"软骨细胞的去分化(Dedifferentiation)现象"。近年来,海藻酸钠三维培养体系被广泛应用于软骨细胞组织工程和软骨细胞生物学研究,因为它能很好地模拟体内环境,有效维持软骨细胞的分化表型。 本研究比较了单层培养和海藻酸钠三维培养对人软骨肉瘤细胞SW1353形态学和表型的影响。结果显示,单层培养的SW1353细胞在8周后发生去分化改变,而海藻酸钠三维培养体系中的细胞在8周后仍能很好地维持软骨细胞的固有表型。与单层培养相比,三维培养中的SW1353细胞增殖缓慢,Ⅱ型胶原合成和分泌低下,这种"休眠"状态可能是三维培养条件下软骨细胞维持其固有表型的原因。 参考文献 [1]CCN5 modulates the antiproliferative effect of heparin and regulates cell motility in vascular smooth muscle cells[J].Andrew C Lake,John J Castellot.Journal of Cell Communication and Signaling.2003(1) [2]Expression of the tissue inhibitor of metalloproteinases(TIMP)gene family in normal and osteoarthritic joints[J].S.Su,J.Grover,P.J.Roughley,J.A.DiBattista,J.Martel-Pelletier,J.-P.Pelletier,M.Zafarullah.Rheumatology International.1999(5-6) [3]Progressive pseudorheumatoid chondrodysplasia:a report of nine cases in three families[J].Hossien Rezai-Delui,Gholamali Mamoori,Eqbal Sadri-Mahvelati,Nor Mohammad Noori.Skeletal Radiology.1994(6) [4]Rabbit articular chondrocytes in alginate gel:characterisation of immobilized preparations and potential applications[J].Christian Tamponnet,Hafida Ramdi,Jean-Baptiste Guyot,Maurice Lièvremont.Applied Microbiology and Biotechnology.1992(3) [5]杨雅.人软骨肉瘤细胞SW1353及WISP3突变型C20/A4软骨细胞的Ⅱ型胶原动力学及定位研究[D].中南大学,2006.查看更多
如何使用人B细胞活化因子(BAFF)ELISA KIT检测样品中的BAFF含量? 人B细胞活化因子(BAFF)ELISA KIT是一种双抗体一步夹心法酶联免疫检测方法,用于测定样品中的人B细胞活化因子(BAFF)含量。 工作原理是将纯化的抗体包被在微孔板上,形成固相载体。然后依次加入标本或标准品、生物素化的抗BAFF抗体和HRP标记的亲和素。经过洗涤后,使用底物TMB进行显色。TMB在过氧化物酶的作用下转化成蓝色,然后在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅与样品中的BAFF含量呈正相关。最后使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),并计算样品的浓度。 如何操作? 1)在使用前,充分混匀所有试剂。避免产生大量泡沫,以免加样时引入误差。 2)根据样品数量和标准品数量确定所需的板条数。建议每个标准品和空白孔做复孔。每个样品根据数量确定,尽量使用复孔。将稀释后的标本加入50ul到反应孔中。 3)将稀释后的标准品加入50ul到反应孔中。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。 4)甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果使用洗板机洗涤,增加一次洗涤。 5)每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。 6)甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果使用洗板机洗涤,增加一次洗涤。 7)每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。 8)取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后立即测定结果。 9)在450nm波长处测定各孔的OD值。 BAFF ELISA KIT的应用 如何研究B细胞活化因子与系统性红斑狼疮的关联性? 本研究旨在探讨B细胞活化因子(BAFF)介导的B细胞激活对系统性红斑狼疮(SLE)的致病机理,并寻找能够从转录水平阻断BAFF基因激活的细胞因子,以治疗SLE。 研究中使用克隆载体pMD18-T-BAFF作为定量模板,基于TaqMan荧光探针技术建立了检测BAFF基因表达水平的实时荧光定量RT-PCR方法。 同时结合自行建立的BAFF血清水平酶联免疫吸附测定(ELISA)方法,研究了部分SLE患者血清BAFF含量与外周血BAFF基因表达水平、免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)浓度以及抗双链DNA(ds-DNA)抗体滴度的相关性。 此外,还从人BAFF基因上游5'侧翼区-1320~-300bp的片段中,选择长度不等的片段作为启动子,与含氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因的质粒组成5个重组体。将这些重组体转染至靶细胞,并测定细胞CAT表达水平,以比较各重组体的启动子活性。同时加入细胞因子(IL-10、IL-4、IFN-γ以及重组BAFF分子),以测定其对BAFF基因启动子活性的影响。 参考文献 [1] An anti-CD45RO immunotoxin eliminates T cells latently infected with HIV-1 in vitro. McCoig C, Van Dyke G, Chou C S, et al. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 1999. [2] Rational design of immunotoxins: current progress and future prospects. Wawrzynczak EJ. Anti Cancer Drugs. 1992. [3] Treatment of hematologic malignancies with immunotoxins and antibody-drug conjugates. DJ FitzGerald, AS Wayne, RJ Kreitman, I Pastan. Cancer Research. 2011. [4] Mucosal T cells expressing high levels of IL-7 receptor are potential targets for treatment of chronic colitis. Yamazaki M, Yajima T, Tanabe M, et al. Immunology. 2003. [5] 周琳. B细胞活化因子与系统性红斑狼疮关联性的研究[D]. 第二军医大学, 2005.查看更多