ANTI-NESTIN抗体的应用及检测原理? ANTI-NESTIN抗体是一种多克隆抗体,能够特异性地结合ANTI-NESTIN。它在多种免疫学实验中被广泛应用,包括Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等。 检测原理是利用双抗体夹心法来测定样本中ANTI-NESTIN的水平。首先,将纯化的ANTI-NESTIN抗体包被在微孔板上,形成固相抗体。然后,依次加入样本中的ANTI-NESTIN和HRP标记的ANTI-NESTIN抗体,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后,加入底物TMB进行显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,然后在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅与样品中ANTI-NESTIN的浓度成正相关。最后,使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中ANTI-NESTIN的浓度。 NESTIN是第VI类中间丝蛋白,分子量为220KD-250KD,位于1号染色体23.1q。巢蛋白基因含有三个内含子和四个外显子,其中两个内含子与神经Nestin合成的蛋白分为三个区域,即N端(1-7aa)、α螺旋区(8-313)和C端(314-1621aa)。α螺旋区又分为四个部分(1A、1B、2A、2B)。 Nestin是第Ⅵ类中间丝的细胞骨架蛋白,广泛表达于多种组织的干细胞或前体细胞中,并被广泛用作干细胞的标志性蛋白。除了维持细胞的正常形态外,nestin还具有抗凋亡作用。抑制细胞中nestin的表达会增强过氧化氢(H202)刺激诱导的神经前体细胞和血管平滑肌细胞的凋亡,而将野生型的nestin转入细胞内则可以起到保护作用,显著减少H202诱导的细胞凋亡。 中间丝蛋白Nestin在糖尿病肾病发病中的作用及机制研究 本研究旨在通过建立糖尿病大鼠模型和体外培养条件下的足细胞,探讨nestin在糖尿病肾小球足细胞损伤中的作用及机制,为进一步阐明糖尿病肾病的发病机制及其防治提供理论依据。 方法:将Wistar大鼠随机分为对照组和糖尿病组。糖尿病组的大鼠通过腹腔注射STZ建立糖尿病模型,对照组则注射等量的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液。在模型建立后的不同时间点,采集大鼠的尿液和血清,并取肾脏进行进一步的实验。 实验内容包括光镜、免疫组织化学、电镜检测、肾小球分离、总RNA和蛋白的提取等。通过免疫组织化学和Western blot检测肾小球内nestin、p-nestin、vimentin、Cdk5/p35蛋白的表达情况;通过免疫荧光双染色检测nestin与vimentin、Cdk5、WT1、α-SMA、synaptopodin、laminin等的共同表达情况;通过免疫共沉淀检测nestin与vimentin蛋白的结合情况;通过Real-time PCR检测肾小球中nestin、vimentin和Cdk5m RNA的表达情况。 参考文献 [1]Cell Biology and Pathology of Podocytes[J].Anna Greka,Peter Mundel.Annual Review of Physiology.2012 [2]Involvement of cyclin‐dependent kinase‐5 in the kainic acid‐mediated degeneration of glutamatergic synapses in the rat hippocampus[J].NooraPutkonen,Jyrki P.Kukkonen,GuiseppaMudo,JaanaPutula,NataleBelluardo,DanLindholm,LauraKorhonen.European Journal of Neuroscience.2011(8) [3]Increased CDK5 Expression in HIV Encephalitis Contributes to Neurodegeneration via Tau Phosphorylation and Is Reversed with Roscovitine[J].Christina Patrick,Leslie Crews,Paula Desplats,Wilmar Dumaop,Edward Rockenstein,Cristian L.Achim,Ian P.Everall,Eliezer Masliah.The American Journal of Pathology.2011(4) [4]Podocytopathy in Diabetes:A Metabolic and Endocrine Disorder[J].Ana Diez-Sampedro,Oliver Lenz,Alessia Fornoni.American Journal of Kidney Diseases.2011(4) [5]刘巍.中间丝蛋白Nestin在糖尿病肾病发病中的作用及机制研究[D].河北医科大学,2012.查看更多
5,7-二氯吡唑并[1,5-A]嘧啶的合成方法是什么? 5,7-二氯吡唑并[1,5-A]嘧啶是一种白色固体,常温常压下存在。它是一种嘧啶类衍生物,类似于吡啶,具有芳香性质。在工业中,它主要用作医药中间体和感光剂的原料。 合成方法 图1 显示了5,7-二氯吡唑并[1,5-A]嘧啶的合成路线。 在冰水浴中,将吡唑并[1,5-a]嘧啶-5,7(4H,6H)-二酮(1克,6.62毫摩尔)、三氯氧膦(7.5毫升,82毫摩尔)和N,N-二甲基苯胺(1.2毫升,9.5毫摩尔)缓慢加入真空干燥的反应瓶中。然后将反应混合物加热至回流反应4小时。反应完成后,将混合物倒入50mL冰水中,并用乙酸乙酯萃取三次。合并分离出的有机层,用盐水洗涤,然后用无水硫酸钠干燥有机层。过滤除去硫酸钠固体后,通过真空蒸发除去溶剂,最终得到5,7-二氯吡唑并[1,5-A]嘧啶产物。 图2 显示了另一种合成5,7-二氯吡唑并[1,5-A]嘧啶的方法。 在零度条件下,将三氯氧膦(10毫升,109毫摩尔)、吡唑并[1,5-a]嘧啶-5,7(4H,6H)-二酮(800毫克,5.29毫摩尔)和二甲基苯胺(1.8克,14.82毫摩尔)加入真空干燥的圆底烧瓶中。在室温下搅拌10分钟后,加热到60度反应,持续3小时。用固体碳酸氢钠将水溶液碱化至pH=9,然后用乙酸乙酯萃取三次。合并的有机物用盐水洗涤,用无水硫酸镁干燥,过滤除去硫酸镁固体,并在真空中浓缩。最终在硅胶上进行梯度洗脱(20-80%EtOAc在庚烷中),得到白色固体的标题化合物。 用途 5,7-二氯吡唑并[1,5-A]嘧啶可用作医药中间体和感光剂的原料。在有机合成转化中,由于嘧啶缺电子的影响,嘧啶环上的氯原子容易被亲核试剂进攻,从而得到脱氯官能团化的产物。此外,还可以使用N-氯代丁二酰亚胺在吡唑环上引入一个氯原子。 参考文献 [1] Shen, Jian et al European Journal of Medicinal Chemistry, 208, 112850; 2020. [2] Cox, Christopher D. et al PCT Int. Appl., 2012044562, 05 Apr 2012. 查看更多