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双木.耳东.
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设备工程师
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原核表达的蛋白,经镍柱纯化后SDS—PAGE有两条几乎接近的带,为什么呢? 可能是杂蛋白的分子大小和目的蛋白接近,建议再用离子柱分离一下。 查看更多
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丙基苯甲酸中有二酸怎样去除? 二元酸在水中的溶解度大一些,反复用热水洗几次就除掉了 查看更多
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为什么跑western的时候溴酚蓝才跑出胶,小分子的marker就全都没了? 以前这样做的没问题的话,那是不是样品配置的问题。为了排除分离胶的问题,可以重复一下之前的那次查看更多
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有没有什么可当做肿瘤细胞迁移能力的marker呢? 先做一个划痕实验看看,再做一个transwell就比较有说服力了。 做迁移,罗氏还有个RTCA的机器,可以根据细胞贴壁后板底的电阻反应迁移细胞的数目,来做迁移。迁移能力的Marker,估计是很难像流式分群那样做,只能做western 看看MMP2、9,FAK等等一系列关键蛋白的变化了 查看更多
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请问如何用RT-PCR的方法怎么检测p38,JNK,ERK通路? 用RT的方法根本行不通。首先不说RNA水平有没有明显变化,单RT来说现在大家也不太接受它的可信度,可以说你想作出什么结果都可以。其次,MAPK途径是通过一系列的磷酸化来调节下游基因表达。p38, JNK, ERK在细胞中的表达总量一般变化不大,但并不是这些蛋白都有活性。只有当MEK1,MEKK1等上游激酶把他们磷酸化以后,磷酸化的p38,JNK,ERK才有活性调节下游基因。如果你用RT或者Northern检查RNA水平的表达,那么一般不会有变化,即使你用普通的抗体检测上述3个基因的表达都不会有什么变化,只有用他们的磷酸化抗体检测才能看到他们的变化。很多文章里面都会用普通抗体证明蛋白水平的表达没有变化,然后用磷酸化抗体证明他们的活性变化。不过抗体比较贵,看看你们老板是不是有足够的米米了。查看更多
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请问对于旋光性的化合物拆分,一般情况胺和酸的比例是多少,为什么文献都不一样呢? 这个二元酸和碱的拆分成盐,起选择性和比例有比较大的关系。曾经有文献报道二元酸和一个碱成盐得到的假如是S-构型,那其和两个碱成盐得到的就是R-构型。查看更多
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酸破坏是否需要中和? 中和是因为C18柱耐pH2-8,只要中和后的pH在这范围内就行。楼主的问题貌似是样品对酸不敏感,这也很正常。查看更多
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sigma公司的PMA时,储存液的浓度是配多少的? 对于保存而言当然是浓度越高越好,稀释1万倍也是很正常的,小量分装也未尝不可。 查看更多
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Icem中O型划分offset具体的意义是什么? offset是指o型分割后两个块中间斜线的长度。选absolute选项后是绝对的长度,如果不选的话,则是0-1中间的相对值,1是最大的长度,其它的值都是相对这个长度的相对值。 查看更多
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A与B结合抑制了B与C的结合能说竞争性抑制吗? 我个人感觉你这个实验应该蛮有意义,但是在你下结论前我想有几个问题是必须要先解释清楚的。1,是不是竞争性抑制,我持保留态度,因为你未能提供太多的描述,但至少它肯可能是竞争关系。在我看来,如果存在抑制关系,最普遍的现象是,首先A-B复合物增多了,同时b-c复合物减少了,同时,游离的单体的量也有变化,即a单体理论上应该减少而C单体理论上增多。如果你是做体内实验,A-B复合物增多,b-c减少的调控变化可能会导致生理或者表型上的变化,或者整个基因表达调控网络的变化;上述我说的是普遍现象,据我了解,有的时候并不符合这样的最普遍现象,有的时候A单体增多,导致b单体的表达量同时增多,这样的结果是,a-b复合体增多,但是不见得b-c复合体就减少。这个现象在做体外实验的时候很难遇得到,从体内直接提取蛋白有可能会遇到。2, 你的这种结合时特异的还是非特异的?我说的非特异,并不是说a-b结合时假阳性,是说a是仅仅针对于b-c有这样的作用,还是普遍性具有竞争作用?我个人意见觉得,竞争性抑制在一定条件下应该像上述1中描述,一种底物浓度的梯度变化,会在一定范围能造成其它底物、复合体的梯度变化。而普遍性抑制我觉的不存在这个关系,从你的描述中我还可以有另一种推测,即,a只是广泛性地“屏蔽”B与c的结合,这种关系我觉得更像是抑制,跟竞争没有关系。3, 你说有可能啊会引起b构想变化而导致b-c复合体减少,这是你的推测呢还是基于实验证据?如果这种构想变化存在,我觉得这也应该算是竞争性抑制的一种吧,因为竞争性抑制是一种普遍的描述,并不管是怎么样竞争的。但是如果你要说清楚这样一点,需要实验证据来支持。以上拙见,供参考 查看更多
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有机物干燥除去溶剂以后减压蒸馏为什么暴沸? 一就是你所要蒸馏的东西里面还含有什么其他的东西没有。比如沸点比较低的,有可能沸点过低而直接被抽出去了。第二就是你在蒸馏头的地方用东西包裹一下用来保温。而最后的接受器放在冰盐浴中,并在泵与装置之间加一个冷阱看看有什么东西会留下。查看更多
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用三溴化硼脱甲基,得到了下列化合物,但不是目标产物? 你底物就是酚甲脂还是上的甲基保护基,如果是做保护基,为何不用苄基或者乙酰基或者TBDMS呢查看更多
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杂质溶液中极不稳定如何进行方法学验证? 给几条建议:1. 对于不稳定的杂质,从结构上判断,其不能遇到活泼氢,所以溶剂不能有水;综合考虑,选择纯乙腈对其进行配制,作为母液。2. 整个验证过程都是现配现进,实验前需要考察一下现配的时间。在实验前,我考虑了一下,配制过程和仪器进样大概要花费10min,所以待杂质H在稀释剂中放置10min后进样考察发现未降解,所以后续可以在这个时间里配好下一针的样。3. 关注实验室湿度。空气中的水分很可能干扰不稳定杂质进行转变的速度。有几天下雨,杂质H变化过快,实验就没有做好。4. 所有的杂质包括不稳定杂质H都是放在一起完成了验证:包括线性、LOQ、LOD、重复性、准确度、中间精密度等。需要加班加点。查看更多
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子弹穿击钢板,为何会弹走? 反弹是不是速度不够,或者材料定义不合适!是用对称模型做的吗?要是对称边界条件定义对的话,反弹也是往上走! 查看更多
中间相炭微球和石墨是什么关系? 如果说MCMB是一种新型石墨,可以吗? ... 不新了,都商业化了 查看更多
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划线接菌,很难长出单菌落或者单菌落很少如何解决? 用酒精泡过的玻璃珠效果更好 查看更多
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求助HRTEM分析? 高分辨,外加stem元素分析才能给出你结论 查看更多
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使用慢病毒进行感染时只能用无血清培养液吗? 感染时可加血清的,稀释加不加要看fbs对你下面的实验有没有影响查看更多
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造山后与后造山阶段有什么区别与联系? “造山”--2个地块碰撞会伴随挤压,挤压引起地壳加厚,地表抬升,继而造山。“造山后”,在造山的后期,由于挤压力的释放,转变为伸展环境,地壳随之减薄,山脉随之垮塌,进入造山后阶段。查看更多
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三个极性相似的化合物过柱子怎么分开? 我只是想打个谱,确认一下结构 ... 爬大板,刮板子吧,这是最快最简单的了 查看更多
简介
职业:上海集泰化工有限公司 - 设备工程师
学校:西北民族大学 - 历史文化学院
地区:安徽省
个人简介:如果你吃了亏,千万不要喝水,不然你会变污的。查看更多
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