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如何纯化his-tag 融合蛋白? 本人对做实验不怎么在行，硕士课题老板给了个蛋白纯化，测活性的题，从去年12月中旬到今年三月，一直没有纯化出来，不知道是什么原因；我是接我上届一个师姐的题，从前期买目的基因质粒，设计引物，PCR扩增，酶切，连接，转化，以及涂板子，菌落PCR鉴定和测序都是她完成的，测序结果显示很好，并未发生突变；之后是通过AP5 培养基的低温诱导表达目的蛋白，蛋白被分泌到细菌周质腔中，裂解液裂解，透析后，用含咪唑的洗脱液洗脱的。所用的平衡缓冲液为20mM,洗脱缓冲液为60；100；150；200；500的浓度梯度洗脱；结果SDS-PAGE考马斯亮蓝染色结果非常不好，和没有纯化差不多，至今也不知道是什么原因；现将图附在下面，请各位帮忙看看，帮忙分析一下原因，不胜感谢！看图请尽量往下拉！下图的第三泳道为Marker,4,5为10mM 咪唑洗脱，6，7为20mM咪唑洗脱，8，9为50mM咪唑洗脱，10为流出液；可以看出50mM洗脱时在位于17KD附近还是有目的蛋白洗脱的，可是这大量的杂蛋白条带是怎么一回事情？难道没有带上Hisb标签的蛋白居然也结合到柱子上头了？是不是蛋白浓度过低就会发生这种情况呢？查看更多 1个回答 . 9人已关注

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请问没有pdb号怎么去做分子对接? 文献名字叫做iscovery of TAK-659 an orally available investigational inhibitor of Spleen Tyrosine Kinase (SYK)。文献里直接用tak-659去和SYK(脾酪氨酸激酶，一种72-kd的非受体胞质)去对接。连pdb 号都没有，也没做同源模建。想问这种情况如何做对接？查看更多 3个回答 . 3人已关注

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人脐静脉内皮细胞培养培养具体怎么配? 求助，人脐静脉内皮细胞培养培养具体怎么配？实验银子有限，用不起ECM 查看更多 1个回答 . 16人已关注

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用PAML中的codeml检测蛋白质是否受到了正向选择? 用PAML中的codeml检测蛋白质是否受到了正向选择。在sites model下，检出受到正向选择的蛋白质中，有部分残基是处于正向选择的。那么是说，只有检出的这部分残基是处于正向选择，而其它的不是吗？其它的残基有没有可能同样也处于正向选择呢？查看更多 1个回答 . 16人已关注

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WB检测LC3观察自噬时，是以LC3-Ⅱ/Ⅰ的变化为主还是LC-Ⅱ的生成为主？我是自噬的初学者，请教下大家：WB检测LC3观察自噬时，是以LC3-Ⅱ/Ⅰ的变化为主还是LC-Ⅱ的生成为主，我在实验中发现这两个指标的变化并不总是一致的，该以哪个为准呢？不胜感激查看更多 1个回答 . 3人已关注

#LC3

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测荧光发射光谱时测量的是粉末还是把粉末溶解进去溶剂里面呢? 测荧光发射光谱时测量的是粉末还是把粉末溶解进去溶剂里面呢？查看更多 1个回答 . 11人已关注

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求助1-甲基六氢-4-H-氮杂卓-4-酮检测方法？求助1- 甲基六氢-4-H-氮杂卓-4-酮检测方法，因为此物质紫外吸收弱，请问有用过此物质的大侠们是怎样检测的呢？一般对于紫外吸收弱的物质怎么进行液相方法开发呢？查看更多 1个回答 . 17人已关注

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求mestrenova使用教程啊？ 有没有哪位有mestrenova的使用教程啊查看更多 1个回答 . 11人已关注

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卡波姆Sf-1中和济6501悬浮问题稠度问题，透明问题？ 求各位大神求解。17744702220手机号，同微信茶水500元相待。感谢查看更多 7个回答 . 2人已关注

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煤分析？求助下盖德网友，我是做煤分析的，昨天朋友拿来一制好的煤样品，我正常分析称内水，称挥发份时候称一次天平结果变一次《小数点后第三位变化，基本都有2位数的变化。煤烧好后，变化较小，有1位数的变化》？我的天平是正常的，也校正过。我把以前我做煤的样品拿来称，也是正常的。请问下群友这是什么煤？有好的称量方法吗？查看更多 1个回答 . 19人已关注

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胺化反应的催化剂选择？ a溴代酮和甲胺水反应，通常需要搅拌72小时，有没有什么催化剂可以加速反应进程，求推荐查看更多 1个回答 . 6人已关注

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PXRD的衍射图是怎么转化成峰值的? 外专业的，导师接了个项目，材料相关，我0背景看了好久看不懂，xrd的那个衍射图谱（就是黑色白色里面一圈圈衍射纹的那个），是怎么转化成那个频谱图（就是横轴2\theta纵轴强度那个）图的？看各种介绍都让我用软件，但我主要想知道原理是取一个中心然后对每个圆圈上的亮度求和吗？还是怎样？谢谢查看更多 2个回答 . 3人已关注

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市售下盖片LIR2016与CR2016的区别？各位朋友们，之前用的锂离子电池下盖片是CR2016，因为快用完了，就买了一些，但是这次卖家发的是LIR2016，问了一下商家，他说LIR是二次电池的，CR是一次电池的，我想知道这两个之间有什么区别吗，影响电池的测试性能嘛查看更多 1个回答 . 10人已关注

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XTT可以用于细菌活性检测么? 师姐说XTT只能用于真菌活性检测，因为真菌有线粒体，细菌没有，请问能够用来检测细菌活性么？查看更多 1个回答 . 5人已关注

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有没有金相大神啊，求助啊？ 金相制作过程中遇到问题查看更多 1个回答 . 5人已关注

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液相有峰，但对应的质谱没响应有什么办法？打算过色谱柱研究一个盐酸多巴胺的破坏杂质，液相上有色谱峰响应，峰高大概8mAu左右，因为极性和分离的原因，流动相是纯水相10mM 醋酸铵，进质谱后发现所有样品TIC结果基本都一样，包括破坏的，没破坏的和空白的样品，正负离子模式结果也一样，目标杂志没响应，请问谁知道该怎么做吗？增大浓度和在流动相里加点甲酸看能不能提高响应？查看更多 1个回答 . 6人已关注

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求一个Bi2S3的XRD标准卡数据？ 求一个Bi2S3的XRD 标准卡数据查看更多 1个回答 . 1人已关注

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醇变溴的反应？我在0度做的时候，三溴化磷一加进去体系就变乱，后来我用零下20度做也拿不到我要的产物点，求做过类似反应的大神指导一下，文献上一模一样的化合物人家95的产率查看更多 2个回答 . 6人已关注

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现在有没有什么能确定细胞处于何种周期？请教一下：现在有没有什么能确定细胞处于何种周期（cell cycle）的成熟或不成熟但比较有前景的技术检测方法？像影像，实验室检查等都可以。最好能附上文献的，万分感激！查看更多 1个回答 . 13人已关注

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如何查找突变位点处于编码蛋白空间结构的具体位置? 已知某基因的某一突变位点，如何查找该突变位点处于编码蛋白空间结构的具体位置？查看更多 1个回答 . 4人已关注

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简介

职业：鑫达中投（北京）企业管理有限公司 - 销售

学校：华南理工大学 - 化工与能源学院

地区：吉林省

个人简介：好事总是需要时间，不付出大量的心血和劳动是做不成大事的。想吃核桃，就是得首先咬开坚硬的果壳。查看更多

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