乳糖胆盐发酵培养基的应用及检测方法？ 背景信息 乳糖胆盐发酵培养基颗粒是一种用于测定大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的固体颗粒培养基。该培养基使用溴甲酚紫作为指示剂，当溶液呈中性时呈蓝紫色，呈酸性时呈黄色。大肠杆菌能够分解乳糖产生酸和气体，因此乳糖胆盐发酵管中的溶液会变成黄色并产生气泡。胆盐对许多杂菌具有抑制作用，但对大肠杆菌没有影响。该培养基的成分包括蛋白胨、牛胆盐、乳糖和溴甲酚紫。 检验原理 蛋白胨提供细菌生长所需的碳源和氮源；牛胆盐可以抑制革兰氏阳性细菌的生长；乳糖是大肠菌群可以发酵的糖类；溴甲酚紫是一种pH指示剂，酸性时呈黄色，碱性时呈紫色。 使用方法 1、称取35克（单料）或70克（双料）的乳糖胆盐发酵培养基颗粒，加入1升蒸馏水或去离子水中，搅拌加热至完全溶解，分装于带有小倒管的试管中，每管加入10毫升培养基，高压灭菌15分钟。 2、处理和稀释样品。 3、(1)食品：取1毫升稀释液加入含有10毫升乳糖胆盐发酵培养基的试管中，根据食品卫生标准要求或对样品污染情况的估计，选择三个适当的稀释度，每个稀释度接种三管。将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1毫升以上者使用双料乳糖胆盐发酵管，1毫升及以下者使用单料乳糖胆盐发酵管。(2)一次性使用卫生用品：取5毫升样液接种50毫升单料乳糖胆盐发酵管。 4、将试管放入36±1℃的培养箱中培养24小时。 5、观察结果。如果所有乳糖胆盐发酵管都不产生气体，则可报告为大肠菌群阴性；如果有产气者，则需要进行分离和确认试验。 应用领域 乳品中大肠菌群快速检测研究 本研究以乳糖胆盐发酵培养基为基本营养成分，分别研究了检测片法和细胞培养瓶剂法，并对模拟条件下可逆性损伤的大肠杆菌进行了复苏实验研究。这为探索适合乳品中大肠菌群快速检测的方法和提高检出率奠定了研究基础。 研究还开发了一种用于快速检测大肠菌群的细胞培养瓶剂法。该方法以乳糖胆盐发酵培养基为营养成分，经过浓缩和干燥制成快速检测瓶剂。以3.5 mol/L NaOH配制的百里香酚酞溶液作为产气指示剂，并制成1×1厘米规格的产气指示试纸。 将样品滴加入细胞培养瓶中，培养24小时。根据培养瓶盖上产气指示试纸颜色变化和瓶内溶液颜色变化，确定可疑阳性样品，并进行氧化酶实验和镜检，验证大肠菌群的存在。实验对细胞培养瓶法进行了大肠菌群的重复性和实际样品检测，并与国标法进行了比较。 结果显示，细胞培养瓶法与国标法的结果符合率达到96%，样品检测报告时间仅需24小时。两种方法的结果在统计学上没有显著差异（P 0.05）。细胞培养瓶剂法表现出明显的技术优势，有利于基层监测机构和生产企业对食品中大肠菌群进行快速检测。 参考文献 [1] Sylvain Orenga, Arthur L. James, Mohammed Manafi, John D. Perry, David H. Pincus. Enzymatic substrates in microbiology. Journal of Microbiological Methods. 2009(2). [2] Journal of Microbiological Methods. Analytical limits of four β-glucuronidase and β-galactosidase-based commercial culture methods used to detect Escherichia coli and total coliforms. 2008(3). [3] World Journal of Microbiology and Biotechnology. A simple bioluminescence procedure for early warning detection of coliform bacteria in drinking water. 2008(10). [4] C. Vernozy-Rozand, C. Mazuy-Cruchaudet, C. Bavai, M.P. Montet, V. Bonin, A. Dernburg, Y. Richard. Growth and survival of Escherichia coli O157:H7 during the manufacture and ripening of raw goat milk lactic cheeses. International Journal of Food Microbiology. 2005(1). [5] 魏斌. 乳品中大肠菌群快速检测研究[D]. 南昌大学, 2011. 查看更多
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