高效感受态细胞制备试剂盒的应用及优势? 背景 [1-3] 高效感受态细胞制备试剂盒是一种用于快速制备高转化效率大肠杆菌感受态细菌的试剂盒。该试剂盒在传统方法的基础上进行了改良,操作简便且转化效率高。使用该试剂盒可以使感受态效率达到108-109cfu/μg质粒。对于不同大小的质粒,效率略有差异。使用高效感受态细胞制备试剂盒制备的超级感受态细菌不仅可以转化质粒,还适用于转化其他连接产物,特别适合于需要高转化效率的平端连接。操作简单,仅需约60分钟即可完成超级感受态细菌的制备。 高效感受态细胞制备试剂盒适用于绝大部分常见的大肠杆菌,包括DH5α、JM109、TG1、HB101和XL-1等。对于一些用于蛋白表达或病毒质粒构建的特殊大肠杆菌也适用,制备出来的感受态菌转化质粒效果可靠。然而,对于转化连接产物的效果可能不如DH5α等其他常见的细菌。高效感受态细胞制备试剂盒提供了专门用于制备超级感受态的特殊细菌培养液,可以提高转化效率,并方便用户,无需自行配制培养液。该试剂盒可多次使用,共可制备足够进行100次转化的感受态细菌。 应用 [4][5] 用于α-淀粉酶基因的克隆与体外诱变研究 该研究为高酶活α-淀粉酶产生菌的筛选提供了新方法,有助于深入研究α-淀粉酶基因的结构和功能关系,并为基因的体外诱变提供了新途径。研究中使用了一种含锥虫蓝的培养基(LBSP)来快速鉴定并筛选α-淀粉酶及其产生菌。与传统的碘-淀粉法相比,该方法操作简便,具有相同的灵敏度和使用范围,并且对淀粉酶及其产生菌没有不良影响。该研究还对高效感受态细胞的制备进行了探究,结果发现高浓度的二价金属离子对感受态细胞制备有害,不同的培养基和器材的清洁度也会影响转化效率。 参考文献 [1]Application of differential display RT-PCR to the analysis of gene expression in a plant-fungus interaction[J].Ernesto P.Benito,Theo Prins,Jan A.L.Kan.Plant Molecular Biology.1996(5) [2]Heterospecific transformation in the genus Haemophilus[J].W.L.Albritton,J.K.Setlow,M.Thomas,F.Sottnek,A.G.Steigerwalt.MGG Molecular&General Genetics.1984(2) [3]High frequency transformation of Bacillus subtilis protoplasts by plasmid DNA[J].Shing Chang,Stanley N.Cohen.MGG Molecular&General Genetics.1979(1) [4]Interspecific transformation of rifampicin resistance in the genus Bacillus[J].N.Harford,M.Mergeay.MGG Molecular&General Genetics.1973(2) [5]马向东.α-淀粉酶基因的克隆与体外诱变[D].华中农业大学,2001.查看更多