细辛的制备方法是什么? 细辛是一种马兜铃科植物,主要产于东北及陕西等地。它有祛风散寒、止痛、温肺化饮、宣通鼻窍等功效,可用于治疗感冒风寒、头痛、鼻塞等症状。细辛的主要成分包括甲基丁香油酚、黄樟醚、细辛醚等。它还含有抗癌活性成分,并具有免疫抑制作用。 细辛酮的制备方法 细辛酮的制备方法如下:首先使用70%乙醇对风干的细辛植物进行回流萃取,然后减压除去溶剂。将乙醇萃取液悬浮在水中,再用轻质石油、CHCl3、EtOAc和正丁基OH进行分配。通过硅胶柱层析和半制备性HPLC,最终得到细辛酮。 主要参考资料 [1] 中医大辞典 [2] 5-Methoxyaristololactam I, the First Natural 5-Substituted [3] Aristololactam from Asarum ichangense 查看更多
为什么Capparishimalayensis在传统医学中被广泛应用? 在维吾尔自治区和中国西藏,Capparishimalayensis被广泛分布,并且其根、树皮、叶子和果实在传统医学中被用于治疗风湿病。先前的研究已经报道了该植物中的生物碱和类黄酮。从植物乙醇提取物中可以分离出洋地黄蒽醌(2)、香草酸(3)、焦没食子酸(4)和麦角固醇(5)等成分。 如何制备洋地黄蒽醌? 洋地黄蒽醌的制备方法如下:首先将风干的Capparishimalayensis植物材料(18kg)粉化,然后用95%EtOH和50%EtOH进行两次萃取。接着对醇提取物进行减压浓缩,并依次用石油醚、CHCl3、EtOAc和正BuOH进行提取。将石油醚馏分(114g)进行硅胶柱色谱纯化,并使用石油醚-EtOAc(1:00:1)的逐步梯度溶剂系统进行洗脱。通过硅胶柱色谱法和SephadexLH-20色谱法,分离得到洋地黄蒽醌(22毫克)。 此外,还可以通过进一步的硅胶柱色谱法和SephadexLH-20纯化,得到更多的洋地黄蒽醌。 主要参考资料 [1] A NEW ANTHRAQUINONE FROM Capparis himalayensis 查看更多
如何使用凝胶DNA回收试剂盒进行DNA纯化? 凝胶DNA回收试剂盒是一种专门用于从DNA琼脂糖凝胶中回收目的DNA的试剂盒。它采用了融胶液,可以完全融化琼脂糖凝胶。同时,它还采用了一种新型的离子交换柱,在特定条件下,能够快速将DNA结合到DNA纯化柱上,并在一定条件下将其洗脱,实现DNA的快速纯化。使用该试剂盒,无需酚氯仿抽提和酒精沉淀,仅需不到20分钟即可完成纯化过程。 每个DNA纯化柱最多可以结合约15微克的DNA。 该试剂盒适用于从DNA琼脂糖凝胶中快速提取含有目的DNA的凝胶块。这些目的DNA可以是PCR产物、质粒DNA酶切产生的DNA片段、超螺旋质粒DNA经单酶切后的线性化产物以及DNA连接产物等。 该试剂盒适用于纯化100bp-10kb的DNA,并且可以完全去除长至30个碱基的引物。 凝胶DNA回收电泳胶图 该试剂盒的DNA回收效率通常为60-90%。接近100bp或大于10kb的DNA片段的回收效率略低一些,而大于10kb的DNA片段的回收效率则会迅速下降。此外,如果样品中的DNA含量特别低,也会导致回收效率下降。 通过该试剂盒纯化得到的DNA可以直接用于酶切、连接、转化细菌、测序、PCR、杂交等后续操作。 在使用该试剂盒时,需要注意以下事项: 1、电泳时最好使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。如果下一步实验要求较高,应尽量使用TAE电泳缓冲液。 2、切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对DNA造成损伤。 3、回收小于100bp或大于10kb的DNA片段时,应增加溶胶液的体积,并延长吸附和洗脱的时间。 4、回收率与初始DNA量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越小,回收率越低。 5、除非另有说明,所有离心步骤均应在室温下使用台式离心机进行。 该试剂盒的应用领域有哪些? 研究了类病毒cDNA体外连接产物回收中出现的非特异条带原因 琼脂糖凝胶电泳是分子生物学试验中常用的DNA分析方法。 通过琼脂糖凝胶电泳分析和回收类病毒cDNA体外连接产物时,常常发现回收的产物中存在单倍体和其他非目标条带。为了探究这种现象的原因,本研究进行了相关实验。 实验结果如下: 1.通过PCR扩增和体外连接获得类病毒cDNA单倍体、二倍体及二倍体以上的多聚体片段混合产物样品,通过琼脂糖凝胶电泳回收其中的二聚体,再经过聚丙烯酰铵凝胶(PAGE)电泳,结果显示除了二聚体外,从两种产物中还回收到了单倍体和其他非目标条带。 2.通过体外连接,获得其他类型的DNA样品,如桃潜隐花叶类病毒(PLMVd)和真菌TP-3-1延伸因子的单倍体、二倍体及二倍体以上的多聚体片段混合产物,然后通过琼脂糖凝胶电泳回收其中的二聚体,结果显示对所有样品回收的二聚体产物中均存在单倍体和其他非目标条带。这表明这种现象不仅存在于类病毒cDNA中,而且也存在于其他类型的DNA中,是一种普遍现象。 3.选取通过PCR获得的类病毒cDNA单倍体、二倍体及二倍体以上的多聚体片段混合产物,使用4种不同品牌的琼脂糖凝胶回收试剂盒回收其中的二聚体,回收产物经过PAGE电泳,结果显示回收产物中除二聚体外均有单倍体和非目标条带,表明这种非特异反应与选用的胶回收试剂盒品牌无关。 参考文献 [1]A rapid and efficient procedure for the purification of DNA from agarose gels.S.C.Girvitz,S.Bacchetti,A.J.Rainbow,F.L.Graham.Analytical Biochemistry.1980 [2]Activation and Repression at the Escherichia coli ynfEFGHI Operon Promoter.Meng Xu,Stephen J.W.Busby,Douglas F.Browning.Journal of Bacteriology.2009 [3]Fangman W L.Nucleic Acids Research.1978 [4]A reliable method for the recovery of DNA fragments from agarose and acrylamide gels.Dretzen G,Bellard M,Sassone-Corsi P,et al.Analytical Biochemistry.1981 [5]刘森.类病毒cDNA体外连接产物回收中出现的非特异条带原因探究[D].华中农业大学,2016. 查看更多
6-甲氧基吲哚的应用和性质? 6-甲氧基吲哚,也称为6-Methoxyindole,是一种白色固体粉末。作为吲哚类衍生物,6-甲氧基吲哚在有机合成和医药化学中起着重要的作用,尤其在药物分子的合成和修饰中应用广泛。 溶解性特点 6-甲氧基吲哚在强极性有机溶剂(如N,N-二甲基甲酰胺和乙酸乙酯)中溶解良好,但在石油醚和乙醚中溶解性较差,且不溶于水。 应用转化和反应条件 6-甲氧基吲哚可作为有机合成和医药化学中间体,常用于药物分子的修饰和合成。在有机合成转化中,可以通过还原剂对吲哚环中的双键进行氢化还原,同时吲哚环上的氮原子可以在碱性条件下进行烷基化反应。 图1 6-甲氧基吲哚的应用转化 在一个干燥的反应烧瓶中,将6-甲氧基吲哚溶于乙酸,然后加入氰基硼氢化钠,搅拌反应混合物2小时。反应结束后将反应混合物倒入NaOH水溶液中,用CH2Cl2萃取反应混合物三次,然后用盐水洗涤和干燥有机层,最后浓缩即可得到氢化的目标产物。 图2 6-甲氧基吲哚的应用转化 在室温下,将6-甲氧基吲哚和氢氧化钾在N,N-二甲基甲酰胺中反应,加入碘单质后搅拌,反应结束后将反应混合物倒入冰水中,过滤得到沉淀物,用冰水洗涤并干燥即可得到目标产物分子。 储存条件 由于6-甲氧基吲哚容易被氧化剂氧化,因此应该避免与氧化剂接触,并在室温和干燥的环境中储存。 参考文献 [1] Sato, Kenjiro et al Bioorganic & Medicinal Chemistry, 22(5), 1649-1666; 2014 [2] Tasch, Boris O. A. et al European Journal of Organic Chemistry, 2013(21), 4564-4569; 2013 查看更多