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爱我别走那行

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RIPA等常用蛋白裂解液提取蛋白，12000g离心后的上清和沉淀是？目标蛋白在两层中的变化相反? 通常我们以RIPA裂解液裂解细胞样品，冰浴裂解30 min后，12000 g离心15 min，取上清测定蛋白然后用2X或者5X的SDS上样缓冲液制备成样品，煮沸后用于WB实验。这个方法很经典，应用广泛。也有一些实验室在培养板中直接加入1X上样缓冲液（约含2% SDS），无须调平蛋白浓度，直接煮沸后用于WB实验。我的问题是这样的：之前用第一种RIPA裂解的方法，已经反复确认了实验结果；偶然，有一次用了第二种方法直接裂解却没有能重复出结果。然后我尝试了同一批样品，用RIPA裂解、8 M 尿素 +4%CHAPS裂解、以及1X上样缓冲液直接裂解的3种方法，前两者又分为离心与不离心，并且把离心后的上清和沉淀均制成样品。结果很奇特：凡是没有离心的样品，用3种方法提取蛋白结果都一直，即处理组的目标蛋白没有变化；而离心的两种方法（RIPA和尿素/CHAPS）的上清液样品与之前变化一直，但在沉淀中的目标蛋白变化却与上清完全相反。这样的结果就让人很纠结了：之前做出来的现象究竟是不是真实的反应目标蛋白的蛋白水平变化？在上下两层中的变化不同究竟能说明什么问题？不知道各位在实验中有没有发现类似的现象？？大家认为蛋白裂解液离心后的上清和沉淀分别是什么？是不是有必要离心？查看更多 1个回答 . 13人已关注

#蛋白裂解液

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离心泵叶轮三维造型时如何控制叶片进口角? 我画过很多三维模型了，但是叶轮一般都是按照图纸给的点坐标描线，再画成面组。如果想在其他几何参数不变的情况下，改变叶轮的进口角或者出口角到一个指定的值，比如进口角27度，我不知道如何去画才能保证进口角是27度，希望指导的朋友指点一下或者还不知道的朋友我们可以共同学习！查看更多 1个回答 . 9人已关注

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Lonza 4D 电转到底行不行？只能用自配的质粒吗？其他质粒转染效果很差是为什么? 买了Lonza电转仪后，除了它自身配制的质粒，实验室自产的质粒电转效果都很差，求解原因，一直用配制的质粒，很影响实验效果和进度，感觉买电转仪没有用啊。查看更多 2个回答 . 3人已关注

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cLogP与LogP如何区别? 如何区别cLogP和LogP,哪一个是脂水分配系数，谢谢！查看更多 1个回答 . 19人已关注

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人手所能克服的最大扭矩是多大? 这应该一个人体工程学相关的问题，但我一直找不到相应的资料，从我个人的工作实践来看，许多人都忽视了这一重要问题。查看更多 2个回答 . 18人已关注

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细胞污染问题求解? 本人前三年做细胞培养，跑WB相对来说都比较顺利。然后去年年初开始发生过一次支原体污染，跑出来的条带全都是杂带。使用了支原体清除试剂之后，WB的结果又OK了。到了去年年末，细胞好像对喹诺酮类的支原体药物产生了抗性。结果又不好了。现在的细胞状态就是，形态大致不改变。细胞核周围都是小黑点（支原体污染后导致细胞凋亡）。培养液从皿的上方往下看是澄清的。但是从侧面看会有轻微浑浊（只是没有以前培养那么澄清了）。虽然没有像细菌污染那样培养基全混了，但是在提蛋白，弃培养基用PBS洗的时候，能发现细胞上面有黏糊糊的一层东西（这个我就不确定是真菌还是支原体了，支原体污染我之前清除以后，细胞核周围凋亡小体就没了，现在加了支原体清除药物，还是有小黑点，所以有没有可能是真菌污染？）。WB跑出来的条带都是杂带，磷酸化蛋白根本出不来（p-p38这种高表达的除外），泳道外很干净，所以不会是封闭问题。一抗二抗之前都OK，所以也不会抗体问题。提蛋白的时候都注意低温，而且加了抑制剂，应该不会降解。前三年跑了2000多块胶的WB，结果都还好，个人觉得也不是WB手法问题，所以觉得应该是细胞污染的问题。由于是稳定转染细胞株，筛了很多单克隆才筛到一个好的，所以想能救就救一下吧。现在想求教几个问题：1.我的细胞是否是支原体污染？2.如果是支原体耐药了，现在还有什么办法吗？3.有没有在提蛋白前把那层白色的东西去掉（我用细胞刮刀的，能不能用胰酶消化，然后差速离心）？4.杂带是不是因为支原体污染导致细胞凋亡，蛋白产生泛素化导致的？5.能否在现在的条件下，暂时应急想办法处理细胞做WB？图片是total JNK就已经跑成这样了，磷酸化的就惨不忍睹了～求助大神们查看更多 4个回答 . 15人已关注

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DCS与STC的反歧化反应都能用哪些催化剂? 面对着多晶硅市场的低迷，DCS与STC的反歧化反应成为一种节约成本、降低能耗的趋势。求教这个反应需要用哪些催化剂呢？具体是怎么反应的？查看更多 2个回答 . 9人已关注

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一水乳糖的鉴别不出来，为什么? 本人在检验一水乳糖时,用薄层色谱爬板子,发现其做不出来，每次做实验时标准溶液总是只有三个点,想请教一下为什么。查看更多 2个回答 . 12人已关注

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进气口能不能开在机翼上方? 米格-29的进气口开在大边条翼下，当需要机头迅速抬起时，使得进气口被屏蔽，为避免发动机停车，在机翼上方开了几个百叶窗（如图），那么进气口能不能开在机翼上方，这样不仅可使原来的进气道处用来增加油量或武器，还可以吸附机翼上的附面层，只要在进气口内侧下方的机翼上开几个百叶窗，当飞机大迎角机动时，打开百叶窗，以使得发动机吸入足够的空气。查看更多 4个回答 . 12人已关注

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铁酸锂制备？ 我是做锂电材料的，最近上级要求做铁酸锂材料，本人之前没有做过。按照文献来做，发现各种问题，有做过相关研究的吗？可以一起交流。查看更多 3个回答 . 11人已关注

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alfa PDMS怎么固化？最近需要用到PDMS来固化封装一个材料，因为不是很懂，所以就直接买了alfa的PDMS M.W.2000，不含固化剂，现在是固化不了哦，请教各位大侠，这个alfa的PDMS需要配什么样的固化剂呢？万分感谢查看更多 1个回答 . 16人已关注

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如何确定p-AKT的检测时间 ? 向各位战友求教：看过多篇英文文献，关于p-AKT的western blot检测时间，有的为1-2小时，有的却有24小时，差别之大，想知道原因。见到以前战友问过类似问题，可是关于这个时间点的把握始终弄不明白，还望实验室大虾不吝指教！查看更多 2个回答 . 12人已关注

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大二做一个课题，不知道公式，求解(づ ●─● )づ？ 薄层色谱法计算物质含量的公式和HPLC计算物质含量的公式查看更多 2个回答 . 13人已关注

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文献中提到rinse这个词，不知道指的是什么? 如题，rinse指的是漂洗吗？还是冲洗？具体的操作方法是什么？查看更多 8个回答 . 6人已关注

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生物医学方向有什么1分多的灌水杂志吗? 我有一水文，是关于T 细胞培养与T细胞免疫的。水成什么样子呢？创新性非常不够，实验方法与实验成果混杂，估计Plos one 之类的2分多的杂志是肯定不要啦。预期投个4区杂志。不过已经写好了，实验又补了。所以就再投啦。大家有什么建议呢？要是建议被采纳必有微信红包啊。查看更多 2个回答 . 2人已关注

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膜材料对金属离子的吸附？请教一下，膜材料在水处理去除金属离子过程中，膜表面会不会吸附金属离子？如果吸附，如何表征膜对金属离子的吸附？有没有一种膜可以不吸附金属离子的？查看更多 1个回答 . 16人已关注

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材料工程求带走？ 317分，一愿报的东北大学材料工程专硕，政治68，英语45，数学69，专业课136. 查看更多 4个回答 . 13人已关注

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硝酸和硫酸的混合液可以水热吗，会爆炸吗？ 如题，有人这么做过吗查看更多 6个回答 . 8人已关注

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循环氢压缩机干气密封停机怎么处理？ 汽轮机连锁停机，压缩机干气密封怎么处理！查看更多 1个回答 . 16人已关注

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GD1管道焊接后是否需要热处理，依据标准是什么? 工艺管道上涉及到了GD1、GD2管道焊接的问题，想咨询一下焊接后是否需要进行热处理，具体的依据标准是哪个？查看更多 1个回答 . 6人已关注

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简介

职业：液化空气有限公司 - 设备工程师

学校：威海职业(技术)学院 - 生物与化学工程系

地区：湖北省

个人简介：持续不断地劳动是人生的铁律，也是艺术的铁律。查看更多

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