甘油-3-磷酸氧化酶,即Glycerol-3-phosphate Oxidase(G3PO),是临床检测血清中甘油三酯含量的重要酶原料,测定血清中的甘油三酯含量可为临床诊断疾病提供依据。
甘油三酯(TG)是脂质的组成成分,是甘油分子中的3个羟基被脂肪酸酯化而形成。它在人体血脂检测和监控中具有重要的临床意义,根据《中国成人血脂异常防控指南(2016年修订版)》的划分标准:空腹甘油三酯<1.7mmol/L(或150mg/dl)为合适水平;≥1.7mmol/L(或150mg/dl)且<2.3mmol/L(或200mg/dl)为边缘升高;≥2.3mmol/L(或200mg/dl)为升高。甘油三酯水平轻度至中度升高会增加患冠心病的危险性,同时甘油三酯升高可见于肥胖、糖尿病、肾功能衰竭、肝脏疾病、甲状腺功能减退症、脂肪萎缩症、骨髓瘤、多囊卵巢综合征等疾病,因此当其升高时应及时采取对应的治疗措施如控制饮食或药物治疗。
一种热稳定性提高的甘油-3-磷酸氧化酶改性酶,其特征在于,对出发酶K3、K7、K10、K17、K45、K135、K212、K225、K248、K267、K486、K523、K573、K595中一个或多个位点的赖氨酸进行了修饰改性;所述修饰改性是指赖氨酸的ε-氨基与含羧基或酯基的化合物发生酰胺化交联。
本发明的修饰方法酶活回收率可达65%以上,应用所述方法制备的G3PO改性酶在46℃孵育30min后的酶活保留率可达70%以上,热稳定性好,可以提高酶在检测试剂(水溶液)中的热稳定性,有利于保证酶在自动生化分析仪上检测甘油三酯。
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