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ELISA双抗体夹心法检测未知抗原过程是什么？用于检测未知抗原的双抗体夹心法: 1. 包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。 2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。 3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。 4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。 5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。 6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。查看更多

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试剂盒预实验如何操作？试剂盒预实验操作步骤： 1、选择2-3个预期差异比较大的样品。 2、按照说明书配制试剂，包括粉剂和自备试剂。注意：现配现用的试剂，一定要在检测前再配置，避免试剂配制之后放置时间太久！ 3、严格按照说明书进行称量、匀浆、离心、取样、测定。其中，鉴定样品要进行至少两次平行测定，作为技术重复，反映客户实验操作和仪器设备的重复性好坏。 4、分析预测定结果。待预实验结果确认无误后，再开始正式测定。查看更多

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PCR反应主要条件是什么？ PCR反应需要一定的条件才能完成，这些条件主要有以下方面：（一）缓冲液任何一个生化反应都必须在一定的缓冲体系中进行，缓冲体系除了提供一定的pH缓冲能力外，还有一些有助于反应进行的成分。PCR反应缓冲液通常采用10 mmol/L Tris-HCl（pH 8.3-9.0，室温）缓冲液体系，其中含有可激活DNA聚合酶的活性中心的二价阳离子，一般采用Mg2+，以MgCl2的形式提供，Mg2+的浓度高低可显著影响 PCR扩增产物的特异性，此外，缓冲液中还含有50 mmol/L的K+，有利于引物与模板的退火。有些缓冲液中还加入明胶或血清白蛋白（100 μg/mL）及去污剂（如Twcen20 等），对Taq DNA聚合酶起稳定作用。（二）模板 PCR模板是含有待扩增序列的 DNA、mRNA或cDNA等，模板数量可直接影响扩增的效果。对于一般的 PCR扩增，104～107个模板分子可达到满意的效果，一般宜用纳克（ng）级的克隆DNA、微克（μg）水平的染色体DNA或102～105拷贝待扩增的DNA片段作为起始材料。除了数量外，模板的质量也非常重要，不能有太多的蛋白质和其他污染，特别是其他DNA的污染，即使是痕量的DNA，也会导致非特异性产物。（三）dNTP dNTP是dATP、dTTP、dGTP、dCTP的总称。贮备液为pH 7.0 左右，其浓度一般为20 mmol，-20℃保存。体系中为20~200 μmol即可，过低则反应速度下降，浓度过高则特异性下降，因为dNTP能络合溶液中的Mg2+，产生错配或抑制Taq DNA聚合酶活性。（四）耐热的DNA聚合酶 PCR反应中使用的 DNA聚合酶必须耐高温，在90℃以上的高温下仍能有活性，正是由于耐热DNA聚合酶的应用才使 PCR技术得以实现，目前使用的耐高温DNA聚合酶主要有Taq DNA聚合酶、Tth DNA聚合酶、Vent DNA聚合酶、Pfu DNA聚合酶和Pwo DNA聚合酶等。（五）引物 PCR反应的最佳条件根据大量的研究报道，PCR反应的最佳条件为：①Taq DNA聚合酶的浓度为1.0-2.5 U/100μL反应液；②dNTP的浓度为20～200 μmol/L；③Mg2+浓度为0.5～2.5 mmol/L；④引物的浓度为0.2～1.0 μmol/L。在准备具体的PCR反应时，还要针对模板特性、PCR仪等进行上述反应体系的优化，并设置试验确定连退火温度、延伸时间，建立其相应的PCR反应最优程序。查看更多

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PCR反应中延伸温度是多少？ PCR反应中延伸步骤的最适温度通常设定在72℃，这是Taq DNA聚合酶的最适活性温度。Taq酶是一种热稳定的DNA聚合酶，能在高温下保持活性，用于在PCR过程中合成新的DNA链。在72℃下，Taq酶的聚合速率约为2000个核苷酸/分钟/酶分子，能够有效催化引物沿着模板DNA链的5'到3'方向合成互补链。这个温度保证了高效的DNA合成，同时避免了过高的温度可能对酶活性的不利影响。如果使用其他类型的DNA聚合酶，最适温度可能会有所不同，但大多数商业化的PCR试剂盒都默认使用Taq酶，因此72℃是最常见的设置。查看更多

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抗体的功能具体有哪些？抗体（antibody, Ab）是由效应B细胞（效应淋巴B细胞）分泌，机体用于抵御外来物质，如病毒，细菌等抗原，结构呈“Y"字型的球状蛋白质，仅仅存在于脊椎动物的血液和B淋巴细胞膜表面。凡是能够跟抗体结合的物质，均被称作抗原，因此对于抗抗体（能够结合抗体的抗体）来说，抗体本身也是一种抗原物质。抗体的功能具体有哪些？ 1、特异性结合抗原：抗体本身不能直接溶解或杀伤带有特异抗原的靶细胞，通常需要补体或吞噬细胞等共同发挥效应以清除病原微生物或导致病理损伤。然而，抗体可通过与病毒或毒素的特异性结合，直接发挥中和病毒的作用。 2、激活补体：IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通过经典途径激活补体，凝聚的IgA、IgG4和IgE可通过替代途径激活补体。 3、结合细胞：不同类别的免疫球蛋白，可结合不同种的细胞，参与免疫应答。 4、可通过胎盘及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通过胎盘进入胎儿血流中，使胎儿形成自然被动免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通过消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。查看更多

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贴壁细胞如何传代？贴壁细胞传代: 1：对于贴壁细胞来说，它需要把上清去掉，用1-2ML的PBS洗一下细胞，然后用枪吸去洗涤液，然后加入胰酶进行细胞消化。（加入1-2ML的PBS，我是会贴壁加入到培养皿的边缘，不能直接对着细胞加入PBS，容易把细胞都吹起来。这一步的目的是为了去掉残余的培养基的，残余的培养基会含有血清和一些离子等，不利于接下来的消化。此外，常见的是0.25%的胰酶。一般根据细胞皿的大小加入胰酶，对于10cm的dish，我会加入1ml的胰酶。） 2：放到37摄氏度培养箱30s-1min（我这里处理的是293T细胞，不同的细胞的消化时间是不一样的，需要具体的去查一查，如果消化的好的细胞是会呈现流沙状态的，上下晃动都会随着移动的。） 3：加入含有血清的培养液终止消化，用枪把培养液吹匀。（因为含有血清可以终止胰酶的消化反应，用枪吹培养皿底是为了把残留在底部的细胞吹起来） 4：转移到15ml的离心管中，离心，200g 5-10min(一般我是1000rpm离心3min) 5：去掉上清液，然后用PBS 重悬细胞，加入的PBS的量是10ML。再次离心，去掉上清。 6：加入适量的培养基，把细胞重悬，然后转移到培养皿里面。放入到37摄氏度的5%的二氧化碳培养箱。查看更多

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化学试剂种类有哪些? 所谓化学试剂：就是化学实验所用的药剂；即化学实验需要的化学药剂。化学品纯度、级别的划分，可以根据化学药剂的质量标准和适用范围来去确定。据此，化学试剂1级划分为标准试剂、生化试剂、电子试剂、实验试剂四个大类。 1级标准的分类原则不但明确了质量标准，而且兼顾了该化学试剂的适用范围。 2级标准是在1级分类基础上更进一步的划分，它是1级标准的进一步明确和限定。 3级标准主要是为了与原来旧标准的对照，或者指明更加准确确定的用途。在1级或2级确定后，一个化学试剂的质量指标，和此质量指标所能够适用的应用目的也就确定了。 1、标准试剂BZ：按照国际规范和技术要求，以明确作为分析仲裁的标准物质。 2、生化试剂SH：配制生物化学检验和生物化学合成。 3、电子试剂DZ：一般指电子资讯产业使用的化学品及材料，主要包括集成电路和分立器件用化学品、印制电路板配套用化学品、表面组装用化学品和显示器件用化学品等。 4、实验试剂SY：按照“主含量"来确定的“合成用试剂"。实验试剂在化学实验室中用来合成制备、分离纯化的、能够满足合成工艺要求的普通试剂。查看更多

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如何提高实验测定效果？ 1、实验前认真阅读说明书，就有疑问的地方，及时与我司人员沟通，并且确认。 2、及时核对试剂盒中试剂数量和状态，如有疑问及时与我司人员沟通，并且分类保存，不宜保存时间过长。 3、严格按照说明书规范操作，做好预测定；并且就预测定结果，及时与我司人员全面沟通（包括样品种类、样品保存状况、有无特殊处理、某些试剂需要现用现配、操作是否规范、仪器工作状态、用水与用品有无污染、测定中有无异常和测定结果是否正常等）。查看更多

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ELISA实验如何清洗ELISA酶标板？ ELISA实验正确地清洗酶标板是成功完成ELISA实验的关键之一。稀释浓缩洗涤液时应使用去离子水或蒸馏水。以下是正确清洗酶标板的注意事项：一、使用多通道移液器首先，检查酶标板确保其牢固放置于板架上。随后，翻转酶标板倾倒液体。按照说明书所示体积在每孔加入洗涤液。按照推荐的时间，计时器设置洗涤液浸泡时间。再次翻转酶标板倒出液体，用干净的吸水纸轻拍，将孔内液体拍干。按照说明书建议的次数重复以上步骤。最后一次在吸水纸上拍干后迅速进行下一步操作。避免孔内液体自然风干。二、使用多管道分液器或洗板机使用与分液器或洗板机配套的真空泵。确保每个通道的分液管道和吸液管道正常运作。设置每次洗涤时的洗涤液的体积和浸泡时间，随后放入酶标板。确保吸液后没有洗涤液残留在孔内。洗板太快或太慢、洗涤或吸液不完全、孔内液体自然风干等均会影响ELISA的精准性。查看更多

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细胞冻存样本复温与检测流程步骤细胞冻存样本复温与检测流程: 1.解冻步骤：从-80℃/-20℃转移至4℃冰箱，缓慢解冻（推荐过夜）. 禁止?：室温快速解冻或水浴加热（易导致蛋白变性或细胞碎片增加）。 2.离心处理：解冻后样本需3000×g离心10分钟（4℃），去除沉淀物或纤维蛋白凝块。取上清液进行检测，避免吸到管底颗粒物。 3.检测前验证：检查样本是否溶血、脂血或浑浊（可能干扰光学检测）。若发现异常，需重新采集或注明状态（部分检测需修正数据）。查看更多

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如何避免血清中沉淀物的产生? 答: （1）解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法（-20℃至4℃至室温），若血清解冻时改变的温度太大（如-20℃至37℃），非常容易产生沉淀物。（2）解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。（3）请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分会因此受到损害，而影响血清的质量。（4）血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。（5）若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。查看更多

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PCR反应产物量过少如何解决？ PCR反应产物量过少解决方案如下：（1）退火温度不合适。以2度为梯度设计梯度PCR反应优化退火温度。（2）DNA模板量太少。增加DNA模板量。（3）PCR循环数不足。增加反应循环数。（4）引物量不足。增加体系中引物含量。（5）延伸时间太短。以1kb/分钟的原则设置延伸时间。（6）变性时间过长。变性时间过长会导致DNA聚合酶失活。（7）DNA模板中存在抑制剂。确保DNA模板干净。查看更多

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多克隆抗体和单克隆抗体的用途有什么多克隆抗体和单克隆抗体的用途： 1、定义多克隆抗体和单克隆抗体有用性的两个关键特征涉及它们各自对抗原的特异性和灵敏度。 2、抗体的特异性是由其结合域和目标抗原之间的相对亲和力决定的，而其他分子是存在的。对这种特异性的利用对免疫学研究人员和临床医生来说是至关重要的，因为许多应用都是利用多克隆和/或单克隆抗体来专门检测目标分子。结合抗原特异性，抗体的灵敏度是一个重要的参数，决定了它在实验室的实用性。 3、高灵敏度的抗体非常适用于诊断应用，如免疫沉淀、West Blot 和酶联免疫吸附试验（ELISA），因为它们能够识别低水平的目标抗原。免疫沉淀是一种分析技术，通过使用特异性结合抗原的抗体将抗原从混合物中分离出来。然后用固定化抗体或磁珠对产生的抗原-抗体复合物进行进一步处理，从而使抗原-抗体复合物在分析前从混合物中分离出来。 4、与免疫沉淀法一样，ELISA 可以使用多克隆或单克隆抗体来检测溶液中的目标抗原。 5、间接和夹心 ELISA 是两种免疫测定形式，在整个过程中使用两种类型的抗体：单克隆抗体由于对目标抗原的高特异性，通常首先应用（一级）；多克隆抗体由于能够以高灵敏度放大低信号，因此作为二级试剂更有用。 6、除了 ELISA，抗体对于免疫组化和流式细胞仪等检测技术也很有用，因为它们可以以高分辨率检测复杂组织或细胞内的抗体-抗原构建。企业对抗体特异性和灵敏度的确认使得像 ELISAs 这样的免疫测定可以根据抗原和抗体的使用方式而采取不同的形式，这使得这些测试具有高度的通用性。例如，一种免疫测定需要高度敏感的测试来检测一种未知的病原体，由于多克隆抗体能够识别一种抗原上的多个表位，因此会从多克隆抗体中获益。如果一个病原体或抗原先前已经被定性，那么在下游应用中使用单克隆抗体来进一步定性可能更合适。 7、在实验室外，抗体可以被用来增强、模仿或恢复免疫系统攻击疾病目标的能力。除了一些例外，单克隆抗体比多克隆抗体更适合于治疗目的，因为它们具有同质性，对单一表位的高特异性和低程度的交叉反应。 8、这些特性对于有效的癌症治疗特别重要，因为肿瘤细胞能够逃避或阻断免疫系统。单克隆抗体疗法对癌细胞发挥作用的一些方式包括涉及直接结合以诱导细胞死亡的机制和阻断肿瘤生长因子和血液供应的间接机制。查看更多

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细胞培养过程中主要污染源有什么？在培养细胞的实验中，难免培养的细胞被污染了，得不到想要的实验结果，那么你知道细胞培养的污染来源有什么吗？细胞培养过程中污染的来源主要有以下几条途径： 1、不洁的动物组织标本很多动物组织本该是无菌的(直接与外界相通的呼吸道和消化道、泌尿系统除外)，但由于取材时不小心也会有污染的机会。组织本身含有细菌，如取材时不用浓的抗生素洗液洗涤浸泡，也会带菌，造成细胞污染。 2、空气空气中含有大量的微生物，如果操作室与外界隔离不严或消毒不充分下，很容易造成污染。另外，净化工作台使用过久，滤板未定期更换或长久不更换，滤气受尘埃堵塞，工作时不带kou罩或外界气流过强，污染空气进入操作区，也会导致污染。春夏季南方地区多雨，空气湿度大，含菌量多，工作不注意也易造成污染。 3、清洗消毒培养用物品、材料洗刷不净，培养用液和器材灭菌不*也会引入微生物和有毒物质。 4、操作来自操作者的污染主要有以下几方面：（1）器材和溶液使用前未仔细检查是否污染过，或者是否已经消毒灭菌处理过，或者虽经处理，时隔已久又末重新处理。（2）操作者未戴kou罩、帽子，呼出气中排出细菌和支原体。（3）培养瓶口未用75%酒精擦和烧灼。（4）操作者不当心，动作不正确而将吸管或无菌器具碰到了污染的物品，如手上皮肤和瓶子外壁等。（5）操作者操作时大声说话，来回走动扬起灰尘等。 5、血清市售血清灭菌不行，潜在病毒和支原体污染。查看更多

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标准品如何梯度稀释？标准品梯度稀释具体过程： 1、标准品稀释液的选择：若血清、血浆、组织匀浆样本，用试剂盒中的标准品稀释液，梯度稀释标准品。若细胞上清样本，建议用细胞培养基梯度稀释标准品。 2、耗材准备：准备8个1.5Ml离心管，写上S1-S7、空白。 3、梯度稀释：根据说明书，每管加入等体积的标准品稀释液（培养基）。吸取同体积溶解好的标准品到S1管中，吹打10次混匀，涡旋5S。从S1管中吸取同体积溶液到 S2管，吹打10次混匀，涡旋5s。同法稀释S3-S7浓度。 4、空白: 标准品稀释液（培养基）作为空白即零浓度。注意：梯度稀释标准品时，涡旋震荡混匀后可短暂离心，让到盖子、壁上的液体到管底，再开始稀释下个浓度。查看更多

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细胞培养中胎牛血清的主要功能细胞培养中胎牛血清的主要功能： 1. 提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。 2. 提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调节它们所结合的物质活力。 3. 有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。 4. 是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。 5. 起酸碱度缓冲液作用。 6. 提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。 7. 参与细胞冻存。在细胞培养中，胎牛血清加入基础培养基的浓度大多为 5% ～ 20% （最常见为 10% ）的。具体到不同试验，应依据文献报导，或细胞类型或基础培养基的成分来确定最佳浓度。胎牛血清应在 -20 ℃储存，运输应干冰冷链运输，避免反复冻融，确保血清中因子活性不受影响，保证血清优良品质。查看更多

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微生物实验的具体步骤是什么微生物实验的具体步骤： 1、准备工作，培养基的配制及灭菌（121-126度灭30分钟高压蒸汽式灭菌），玻璃器皿的灭菌（170度灭2小时干热灭菌，也可用湿热灭菌）若量大可加长灭菌时间。 2、微生物实验室及无菌操作台开紫外灯灭菌1小时，关闭后至少半小时才进入无菌室，我们一般1小时后才进去。因为紫外灯照射后有残留。 3、进入无菌室要穿戴专门的衣服，帽子，鞋子，口罩，手套。在接触无菌的东西都要用75%的酒精喷洒或涂抹，如果是药品就要求更严。 4、实验完后，把平皿倒置放入设定好温度的培养箱内，并在要的时间观察记录。 5、完后无菌室可以打开通风，不然里面的酒精味很难闻！查看更多

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ELISA试剂盒保存更安全要点是什么？ 1、要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因此，在以HRP为标记酶的ELISA试剂盒测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很容易在温育过程中吸附于固相，从而与后面加入的HRP底物反应显色。 2、样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染，一则细菌的生长，其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用；二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。 3、血清标本如是以无菌操作分离，则可以在2～8℃下保存一周，ELISA试剂盒如为有菌操作，则建议冰冻保存。样本的长时间保存，应在-70℃以下。 4、冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。ELISA试剂盒标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，从而引起假阴性结果。此外，冻融标本的混匀亦应注意，不要进行剧烈振荡，反复颠倒混匀即可。 5、标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时，应离心沉淀后取上清检测。Elisa试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎（HEV）病毒 IgM 抗体ELISA检测。查看更多

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抗原抗体反应的特点有什么? 抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。这种反应既可在机体内进行，也可以在机体外进行。在机体内，当免疫细胞被抗原激活后，由B细胞分化成熟为浆细胞后所合成、分泌的一类能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白（immunoglobulin，Ig），激活补体系统从而解除抗原对机体的损伤。抗原抗体反应的主要特点有： 1、特异性：特定的抗体只能与特定的抗原（肽段/蛋白）结合，这在WB一抗二抗的种属及反应性的选择常用到； 2、比例性：抗原抗体在整个反应中存在一定的量比关系，只有当二者浓度比例适当时才出现可见反应；WB中蛋白上样量和一抗二抗的稀释比例与此有关，实际操作中抗体的量相对较多，这也是为何抗体可以反复使用的原因之一； 3、可逆性：抗原抗体的结合是非共价结合，在一定条件下这种非共价结合是可逆的；因此，同一NC膜/PVDF膜在Stripping（抗体洗脱）以后可以用来检测其他蛋白； 4、阶段性：抗原抗体特异性反应分两阶段，第一阶段反应迅速，第二阶段反应缓慢，两阶段均为特异性结合；WB中抗原抗体结合在室温下，反应1小时结合大约可达95%，2小时大约可达97%以上；反应4-6小时大约可达90%，8小时大约可达95%。查看更多

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抗原抗体反应影响因素有哪些？抗原抗体反应是ELISA实验中最常见的一个实验，抗原抗体反应的影响因素主要有三个，具体总结如下： 1、温度：温度影响分子的活动速度，20-40度是温度越高，结合越快，超过56度抗原抗体就会失活。 2、抗原抗体的相对浓度：比例合适结合越好。否则会出现前、后带现象。 3、金属离子;许多抗原抗体的反映需要金属离子参加。查看更多

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简介

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个人简介：上海抚生实业有限公司 Shanghai Fusheng Industrial Co., Ltd.成立于2012年，经过数年的努力已迅速成为集科研和生产为一体的专业化生物工程公司。特别是ELISA研发，代测，技术服务这一产品已使上海抚生成为中国知名公司。公司产品涵盖ELISA研发、细胞培养，各种生化试剂、各种酶类、分子生物学试剂盒、培养基、自产实验室耗材、小型仪器等。此外、上海抚生还代理了美国药典标准品，中检所标准品，sigma，ScienCell，ATCC，wak0，omega，Worthington、MBI、Bioworld、Calendon等国外各类知名公司的产品。上海抚生将进一步加强人才经营、产品经营，不断提升企业的核心竟争力，实现具有高科技产业体系、知识化创业团队的国际化的公司，服务于生命科学领域，迎接世界经济一体化所带来的机遇与挑战。查看更多

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企业名称：上海抚生实业有限公司

企业性质：代理商,

主营业务：生化试剂，标准品,对照品，PCR试剂盒，核酸检测试剂盒，荧光定量检测试剂盒，生化试剂盒，比色法试...

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