小鼠抗GAPDH单克隆抗体的应用及检测原理? 小鼠抗GAPDH单克隆抗体是一种能够特异性结合GAPDH的鼠源单克隆抗体,主要用于多种免疫学实验,如Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等。 检测原理:采用双抗体夹心法来测定样本中的GAPDH水平。首先,在微孔板上包被纯化的GAPDH抗体,形成固相抗体。然后,依次加入样本中的GAPDH和与HRP标记的GAPDH抗体结合的复合物,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后,加入底物TMB进行显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,然后在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中的GAPDH浓度成正相关。最后,使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中GAPDH浓度。 GAPDH或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)的英文缩写。GAPDH是糖酵解反应中的一个关键酶,在各种组织的细胞中广泛分布。 GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量约为146kDa,检测条带大约在36kDa。GAPDH基因在几乎所有组织中都高水平表达,被广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。由于GAPDH作为管家基因在同种细胞或组织中的蛋白质表达量一般是恒定的,因此在使用GAPDH内参抗体时,可以将每个样品测得的目的蛋白含量与本样品的GAPDH含量相除,得到每个样品目的蛋白的相对含量,然后再进行样品与样品之间的比较。 小鼠抗GAPDH单克隆抗体在海洋鱼类细菌性病原微生物研究中的应用 用于海洋鱼类细菌性病原微生物GAPDH蛋白的定位和功能初步研究 在对海洋鱼类病原微生物GAPDH蛋白的定位研究中,成功克隆了六种病原菌GAPDH编码基因,并在大肠杆菌中实现了这六个基因的重组表达。随后,制备了迟钝爱德华氏菌EIB202重组蛋白GAPDH的多克隆抗体。通过Western blotting、间接免疫荧光观察和流式细胞仪分析等方法,发现所选取的六种鱼类重要病原菌(迟钝爱德华氏菌、鲶鱼迟钝爱德华氏菌、嗜水气单孢菌、鳗弧菌、溶藻弧菌和哈维氏弧菌)中的GAPDH蛋白均向胞外分泌,并且在细胞表面也有分布。 通过对斑马鱼进行的实验发现,来自不同病原菌的重组蛋白均具有明显的免疫保护作用,并且它们之间存在一定的交叉免疫保护。最后,研究了迟钝爱德华氏菌EIB202的GAPDH过表达菌株对EPC细胞的侵染能力,结果发现GAPDH与病原菌的黏附存在一定的相关性。这些研究结果为将来利用GAPDH蛋白作为广谱型保护性抗原蛋白,开发针对养殖水体多病原的亚单位疫苗提供了优选靶标,并为进一步研究迟钝爱德华氏菌中GAPDH蛋白在鱼类致病机制中的功能奠定了基础。 参考文献 [1]QseBC controls flagellar motility,fimbrial hemagglutination and intracellular virulence in fish pathogen Edwardsiella tarda[J].Xin Wang,Qiyao Wang,Minjun Yang,Jingfan Xiao,Qin Liu,Haizhen Wu,Yuanxing Zhang.Fish and Shellfish Immunology.2011(3) [2]Isolation and characterisation of EfeM,a periplasmic component of the putative EfeUOBM iron transporter of Pseudomonas syringae pv.syringae[J].Mohan B Rajasekaran,Sue A Mitchell,Trevor M Gibson,Rohanah Hussain,Giuliano Siligardi,Simon C Andrews,Kimberly A Watson.Biochemical and Biophysical Research Communications.2010(3) [3]A novel multivalent vaccine based on secretary antigen-delivery induces protective immunity against Vibrio anguillarum and Aeromonas hydrophila[J].Lingyun Zhou,Xiuhua Wang,Qin Liu,Qiyao Wang,Yan Zhao,Yuanxing Zhang.Journal of Biotechnology.2010(1) [4]Characterization of OmpK,GAPDH and their fusion OmpK–GAPDH derived from Vibrio harveyi outer membrane proteins:their immunoprotective ability against vibriosis in large yellow croaker(Pseudosciaena crocea)[J].C.Zhang,L.Yu,R.Qian.Journal of Applied Microbiology.2007(5) [5]李小勇.海洋鱼类细菌性病原微生物GAPDH蛋白的定位和功能初步研究[D].华东理工大学,2011.查看更多
IBX氧化反应的特点及应用? IBX氧化反应是一种温和且适用范围广泛的氧化反应。然而,由于IBX在有机溶剂中的溶解性以及高价碘的不稳定性,限制了其在有机反应中的应用。 2-碘酰基苯甲酸(IBX)是一种能在温和条件下进行多种氧化反应的试剂。它可以通过简单的合成方法制备得到。然而,长期以来,由于IBX在除了DMSO以外的有机溶剂中的溶解性较差,因此没有被广泛应用。最近,Nicolaou等人的研究取得了一些令人期待的进展。 IBX氧化反应的机理 研究表明,IBX氧化反应在存在水的情况下进行效果不佳。一种通过配体交换的反应机理被提出。 IBX氧化反应的实例 IBX可以实现1,2-二醇的氧化反应,而无需离解醇基。 此外,IBX还可以氧化α,β-不饱和酮、苄基位的亚甲基、烷基胺等。 在NHS作为添加剂的条件下,IBX可以将底物氧化为羧酸。此外,通过过一硫酸氢钾作为氧化剂并加热,只需加入催化量的IBX即可实现氧化反应。 当体系中同时存在伯醇和仲醇时,IBX可以实现对仲醇的选择性氧化。 此外,还可以使用2-碘苯磺酸作为高活性的氧化催化剂,生成IBX的磺酸。 最后,IBX还可以将酰胺氧化为腈。 IBX氧化反应的实验步骤 在进行IBX氧化反应时,需要注意IBX中的碘处于高价态,存在爆炸的风险。因此,在大量反应和取用IBX时需要特别小心。 参考文献 [1] Mazitschek, R.; Mulbaier, M. M.; Giannis, A. "IBX: A Versatile and Mild Oxidant for Organic Synthesis" Angew. Chem. Int. Ed. 2002, 41, 4059. [2] Kuhakarn, C.; Kittigowittana, K.; Pohmakotr, M.; Reutrakul, V. "IBX-Mediated Oxidation of Alcohols to Carbonyl Compounds" Tetrahedron 2005, 61, 8995. [3] Uyanik, M.; Akakura, M.; Ishihara, K. "IBX-Mediated Oxidation of Alcohols to Carbonyl Compounds" J. Am. Chem. Soc. 2009, 131, 251. [4] Bhalarao, D. S; Mahajan, U. S.; Chaudhari, K. H.; Akamanchi, K. G. "IBX-Mediated Oxidation of Alcohols to Carbonyl Compounds" J. Org. Chem. 2007, 72, 662. [5] Plumb, J. B.; Harper, D. J. "IBX-Mediated Oxidation of Alcohols to Carbonyl Compounds" C&EN News 1990, July 16, 3. 查看更多