如何实现高对映体纯度的酒石酸制备?酒石酸具有L(+)和D(-)型对映体,是很多精细化学品和药物合成的手性前体元件。自然界中的酒石酸以L(+)型为主,而D-酒石酸在自然界中较少存在,同时由于酒石酸是镜像对称的小分子量化合物,化学方法制备高对映体纯度酒石酸也比较困难。通过环氧化物水解酶等生物催化剂可以水解顺式环氧琥珀酸,高效制备高对映体纯度的酒石酸,其中产生L(+)和D-酒石酸的顺式环氧琥珀酸水解酶分别称为CESH[L]和CESH[D]。虽然在上世纪70年代就已经在自然界中发现了CESH[L]和CESH[D],并随后在工业化生产酒石酸中得到了应用,但由于缺乏这两种酶的晶体结构,它们的立体催化机制一直还不清楚。此外,环氧化物水解酶种类繁多,已有的研究表明可以通过分子改造实现对不同种类的环氧化物底物进行水解,从而可以用来制备多种手性化合物,在生物催化剂的开发中具有重要意义。 中国科学院青岛生物能源与过程研究所代谢物组学研究组研究人员在前期获得的CESH[D]高纯度表达纯化的基础上,通过与清华大学研究人员合作,成功解析了CESH[D]的高分辨晶体结构,并根据结构阐释了CESH[D]的立体催化机制,发表在Chem. Commun.上 [1] 。CESH[D]的结构表明,一个锌离子在底物结合中起到了关键作用,而周边残基通过大量的氢键作用使得催化残基和底物被精确固定,从而实现了高精度的立体催化,产生高对映体纯度的D-酒石酸。对CESH[D]的结构和催化机制的阐明,同时为基于这类酶进行新型生物催化剂设计开发提供了基础。 参考文献 [1] Structural insight into the catalytic mechanism of a cis-epoxysuccinate hydrolase producing enantiomerically pure d(?)-tartaric acid. doi: 10.1039/C8CC04398A查看更多
人抗丙型肝炎病毒抗体(ANTI-HCV)ELISA KIT的应用研究? 背景 [1-3] 人抗丙型肝炎病毒抗体(ANTI-HCV)ELISA KIT是一种用于检测丙型肝炎病毒感染的试剂盒。该试剂盒使用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体。在检测过程中,依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体和HRP标记的亲和素,并经过彻底洗涤后用底物TMB显色。通过测定吸光度(OD值)来计算样品浓度。 丙型病毒性肝炎是一种由丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的病毒性肝炎。该病主要通过输血、针刺、吸毒等途径传播。据世界卫生组织统计,全球约有1.8亿人感染了HCV,每年新发丙型肝炎病例约3.5万例。丙型肝炎的流行导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化,部分患者可能发展为肝硬化甚至肝细胞癌(HCC)。HCV病毒体呈球形,直径小于80nm,为单股正链RNA病毒,在核衣壳外包绕含脂质的囊膜。 应用 [4][5] 人抗丙型肝炎病毒抗体(ANTI-HCV)ELISA KIT可用于多表位融合HCV抗原的构建与双抗原夹心检测anti-HCV的可行性研究。anti-HCV检测对于控制HCV经输血传播和及时诊断HCV感染患者发挥了重要作用。目前所用的ELISA检测试剂在灵敏度和特异性上有了很大提高,但在检测低感染率人群时特异性仍不理想。双抗原夹心法在方法学上比目前所用的间接法具有更好的特异性和灵敏度。本研究旨在建立双抗原夹心anti-HCV ELISA检测方法,以解决间接法特异性不足的问题。通过构建多表位融合重组HCV抗原,该方法具有极好的特异性和灵敏度。 参考文献 [1] Genetic complexity and serum reactivity of HVR1 quasispecies of hepatitis C virus in patients with cirrhosis. Fan X, Di Bisceglie AM. The American journal of Gastroenterology. 2002. [2] Genetic complexity and serum reactivity of HVR1 quasispecies of hepatitis C virus in patients with cirrhosis. Fan X, Di Bisceglie AM. The American journal of Gastroenterology. 2002. [3] Hepatitis C virus nonstructural 3 protein: recombinant NS3 protein of the Thai isolates as an antigen in a diagnostic assay. Kanistanon D, Wongprompitak P, Dharakul T, et al. Asian Pacific Journal of Allergy and Immunology. 2002. [4] Expression of hepatitis C virus hypervariable region 1 and its clinical significance. Zhang XX, Zhang SY, Liu J, et al. World Journal of Gastroenterology. 2003. [5] 李保昌. 多表位融合HCV抗原的构建与双抗原夹心检测anti-HCV可行性研究[D]. 中国人民解放军军事医学科学院, 2004.查看更多