恩曲替尼对Trk, ROS1和ALK的抑制作用及其活性实验方法?恩曲替尼是一种有效的抑制剂,对TrkA、TrkB、TrkC、ROS1和ALK具有高度的抑制活性。它能够阻断这些靶点的信号传导,并抑制细胞系的增殖。恩曲替尼还能够诱导肿瘤消退,对携带各种驱动基因的异种移植物显示出显著的治疗效果。 一、恩曲替尼的生物活性详解: 1)体外活性 恩曲替尼在抑制多种细胞系的增殖方面表现出优异的活性。它对TRKA驱动的结肠直肠癌细胞系KM12、ALK依赖性ALCL细胞系SU-DHL-1、Karpas-299、SUP-M2和SR-786、ALK依赖性NSCLC细胞系NCI-H2228以及FLT3依赖性AML细胞系MV-4-11均具有较低的IC50值。此外,恩曲替尼还能够有效抑制ALK依赖性信号传导和携带EML4-ALK重排的细胞系的生长。 恩曲替尼还能够选择性地抑制Ba/F3-TEL-TRKB、Ba/F3-TEL-TRKC和Ba/F3-TEL-ROS1细胞的增殖,与非靶向激酶相比具有高度的选择性。此外,恩曲替尼还能够显著抑制表达TrkB的NB细胞的生长,并且与Irino-TMZ联合使用时能够增强其生长抑制效果。 2)体内活性 恩曲替尼在携带肿瘤的小鼠中能够诱导相关人类异种移植肿瘤的消退。它对TRKA依赖性结直肠癌KM12、ROS1驱动的肿瘤以及不同组织起源的ALK依赖模型均具有显著的治疗效果。与对照组相比,单药治疗能够显著抑制肿瘤生长。 在携带Karpas-299和SR-786异种移植物的小鼠中,恩曲替尼能够诱导完全肿瘤消退。在NPM-ALK转基因小鼠中,恩曲替尼能够诱导胸腺和淋巴结中观察到的肿瘤块完全消退。在NB异种移植模型中,恩曲替尼联合治疗能够增强常规化疗的疗效。 二、恩曲替尼的活性实验方法: 1)动物实验 使用含有1%吐温80的0.5%甲基纤维素重建恩曲替尼,并以10mL/kg的最终给药体积口服给小鼠。当肿瘤平均大小达到0.2cm3时,开始使用恩曲替尼、Irino和TMZ进行治疗。当肿瘤体积达到3cm3时,处死小鼠并收获肿瘤进行蛋白质表达分析。 2)细胞实验 将LF、NLF-TrkB、SY5Y或SY5Y-TrkB细胞接种于96孔板中,并暴露于不同浓度的药物。在加入药物后的不同时间点收获细胞,并使用标准SRB测定方案分析细胞活力。 综上所述,恩曲替尼是一种有效的口服抑制剂,对Trk、ROS1和ALK具有高度的抑制活性。它在体内和体外均能够抑制细胞增殖并诱导肿瘤消退,具有很大的治疗潜力。 参考文献: [1]. Ardini E, et al. Entrectinib, a Pan-TRK, ROS1, and ALK Inhibitor with Activity in Multiple Molecularly Defined Cancer Indications. Mol Cancer Ther. 2016 Apr;15(4):628-39. [2]. Iyer R, et al. Entrectinib is a potent inhibitor of Trk-driven neuroblastomas in a xenograft mouse model. Cancer Lett. 2016 Mar 28;372(2):179-86. [3]. Lyer R, et al. Cancer Res. 2015, 75, 5390.查看更多