晚期糖基化终末产物特异性受体的应用研究? 晚期糖基化终末产物特异性受体(抗体)是一类多克隆抗体,能够特异性结合晚期糖基化终末产物。这些抗体主要用于进行晚期糖基化终末产物的检测,包括Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。 AGEs是由蛋白质、脂肪和核酸的氨基基团与还原糖(如葡萄糖、果糖、戊糖等)发生非酶催化反应而生成的稳定的共价化合物。 晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)是一组具有高度活性的终产物,形成于蛋白质、脂肪酸或核酸的氨基基团与还原糖的醛基之间发生的非酶性糖基化反应(也称为Maillard反应)。这些终产物的结构具有高度的异质性。 Maillard反应的具体形成过程如下:①大分子末端的还原性氨基与葡萄糖等还原糖分子中的醛基进行加成,形成可逆的Schiff bases,这个反应迅速且高度可逆。Schiff bases的数量主要取决于葡萄糖的浓度,当葡萄糖被清除、浓度下降时,Schiff bases会在数分钟内发生逆转;②经过数天,不稳定的Schiff bases会逐渐发生Amadori重排反应,并形成相对稳定的醛胺类产物。这个过程发生得较为缓慢,但快于其逆反应,因此Amadori产物能在蛋白质上积聚,并在数周内达到平衡。Amadori产物的数量与葡萄糖的浓度相关。 AGEs在体内的积聚会引发糖尿病的各种并发症。它们会导致血管的基质成分胶原蛋白糖基化并交联,使LDL与AGEs形成AGEs-LDL,从而影响LDL的清除,导致体内脂质增加。此外,它们还会与内皮下单核细胞受体结合,导致单核细胞分泌细胞因子增加,从而增加血管粥样硬化的发生机会。 研究RAGE对乳腺癌生物学行为变化的影响 本研究探讨了RAGE对乳腺癌生物学行为变化的影响,并进行了体内和体外研究。 体外研究中,选择了乳腺癌细胞系MDA-MB-231(三阴性)、SK-Br-3(HER2阳性)和MCF-7(ER阳性)作为研究对象,通过靶向RAGE的siRNA降低这三种细胞系中RAGE基因的表达。 通过实时荧光定量PCR和Western blot检测RAGE、NF-κB P65、Cyclin D1和PCNA的表达。通过MTT法和细胞周期分析法研究了RAGE敲低对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。 另一方面,在体内研究中,将21只裸鼠随机分为六组,分别为RAGE-siRNA组、RAGE-siRNA+Doxorubicin组、Negative RNA+Doxorubicin组、Doxorubicin组、Negative siRNA组以及空白对照组。通过游标卡尺测量、生物发光成像(BLI)和磁共振成像(MRI)监测移植至裸鼠体内的肿瘤生长情况。随后,通过免疫组化(IHC)分析肿瘤样本中RAGE、PCNA、CyclinD1和NF-κB p65的表达水平。 结果发现,RAGE的表达水平与乳腺癌的严重程度相关。此外,下调RAGE表达可以降低体外培养的三种乳腺癌细胞系(MDA-MB-231、SK-Br-3和MCF-7)的增殖水平,并且可抑制移植到裸鼠体内的肿瘤生长。 靶向RAGE的siRNA可以将细胞阻滞在G1期,并且抑制DNA的合成。此外,实时荧光定量PCR、Western blot和免疫组化结果显示,靶向RAGE的siRNA可以降低核转录因子NF-κB p65、细胞增殖标记PCNA和CyclinD1的表达。 参考文献 [1] A.Bierhaus, P.P.Nawroth. Multiple levels of regulation determine the role of the receptor for AGE(RAGE) as common soil in inflammation, immune responses and diabetes mellitus and its complications[J]. Diabetologia. 2009(11). [2] Daolin Tang, Rui Kang, Herbert J.Zeh, Michael T.Lotze. High-mobility group box 1 and cancer[J]. BBA-Gene Regulatory Mechanisms. 2009(1). [3] Andrea Proctor Subhawong, Ty Subhawong, Hind Nassar, Nina Kouprina, Shahnaz Begum, Russell Vang, William H.Westra, Pedram Argani. Most Basal-like Breast Carcinomas Demonstrate the Same Rb?/p16+ Immunophenotype as the HPV-related Poorly Differentiated Squamous Cell Carcinomas Which They Resemble Morphologically[J]. The American Journal of Surgical Pathology. 2009(2). [4] Angelika Bierhaus. Regulated Proteolysis of RAGE and AβPP as Possible Link Between Type 2 Diabetes Mellitus and Alzheimer's Disease[J]. Journal of Alzheimer's Disease. 2009(4). [5] 热娣. 特异性靶向晚期糖基化终产物受体(RAGE)的siRNA降低人类乳腺癌增殖研究[D]. 中南大学, 2013.查看更多
如何制备高纯度的酸枣仁皂苷A对照品? 酸枣仁皂苷A是一种具有广泛生物活性的成分,被收录在2015年版《中国药典》中。酸枣仁是鼠李科枣属植物酸枣的干燥成熟种子,具有补肝、宁心、敛汗、生津等作用,被广泛应用于治疗虚烦不眠、惊悸多梦、体虚多汗等症状。酸枣仁皂苷A是酸枣仁中含量较高的成分,具有镇静催眠、抗心肌缺血、抗抑郁、降血脂和降压等生物活性。 制备方法 下面是一种制备高纯度酸枣仁皂苷A对照品的方法: A. 原料提取:将酸枣仁药材与乙醇溶液按照一定的体积质量比混合,乙醇溶液的浓度为60-75%。在60℃下进行热提取,冷却后抽滤,将滤液浓缩至无醇味。 B. 大孔树脂富集:将步骤A的浓缩液用大孔树脂进行静态吸附,然后用水和乙醇溶液洗脱杂质,再用乙醇溶液洗脱目标物质,收集洗脱液,浓缩至原体积的1/10。 C. 萃取:向步骤B的浓缩液中加入正丁醇进行萃取,收集正丁醇层,浓缩得到酸枣仁皂苷A醇提物。 D. 中压制备:将酸枣仁皂苷A醇提物用乙腈水溶解后进行中压制备,洗脱后得到纯度约为60%的酸枣仁皂苷A半成品。 E. 凝胶纯化:将酸枣仁皂苷A半成品用甲醇水溶解后进行凝胶柱纯化,洗脱后经过HPLC跟踪检测,收集目标流份,经过浓缩和冷冻干燥后得到纯度约为95%的酸枣仁皂苷A粗品。 F. 高压制备:将酸枣仁皂苷A粗品用甲醇水溶解后进行高压制备,洗脱后收集目标流份。 G. 产品回收:将高压流份浓缩、冷冻干燥后得到纯度为100%的酸枣仁皂苷A对照品。 参考文献 [1] [中国发明,中国发明授权] CN201710860374.4 一种酸枣仁皂苷A对照品的制备方法 查看更多