抗原与抗体的特异性结合机制? 羊抗猪IGG-HRP是一种特异性结合猪IGG-HRP的HRP羊多克隆抗体。它在猪IGG-HRP检测实验中广泛应用于ICC/IF、Dotblot、ELISA、IHC-P、IHC-Fr、Immunomicroscopy、WB等领域。 抗原与抗体的特异性结合是基于它们之间的结构互补性和亲和性。这种特性取决于抗原和抗体分子的空间构型。除了分子构型的互补性外,抗原表位和抗体超变区还必须紧密接触才能产生足够的结合力。 抗原抗体反应可以分为两个阶段:第一阶段是抗原与抗体特异性结合的阶段,这个阶段的反应很快,只需要几秒钟到几分钟,但是没有可见的反应。 第二阶段是可见反应阶段,这个阶段在适当的温度、pH值、电解质和补体的影响下,抗原抗体复合物会出现沉淀、凝集、细胞溶解和补体结合介导的肉眼可见的反应。这个阶段的反应较慢,通常需要几分钟到几小时的时间。 免疫球蛋白G(IgG)是在脾脏和淋巴结中合成的,它在人体血清中的含量最高(占Ig总量的75%)。IgG主要分布在血清和组织液中,是抗细菌、抗毒素和抗病毒抗体的主要组成部分。它也是机体抗感染免疫过程中的重要物质基础。由于IgG的含量最高,它是人体免疫反应的最重要物质基础。此外,IgG是唯一能够通过胎盘屏障的免疫球蛋白,对于哺乳动物的新生幼仔和新生儿抗感染起着重要作用。 抗原与抗体的应用 流行性乙型脑炎病毒E蛋白主要抗原域与猪IgG1-Fc片段在大肠杆菌中的融合表达及其应用研究 该研究利用大肠杆菌的原核表达系统,将JEV主要结构基因E蛋白基因和猪IgG1-Fc片段基因进行了融合表达。同时,利用表达产物建立了一种新型的SPA协同凝集试验,用于检测JEV抗体。此外,还通过免疫BALB/c小鼠评价了融合蛋白E-pFc诱导抗JEV特异性免疫的效果。这为流行性乙型脑炎的血清诊断方法和新型疫苗的研制奠定了基础。 研究结果如下:1. 根据GenBank公布的猪IgG1的核苷酸序列,设计了一对引物,克隆了猪IgG1-Fc域中包含部分CH2和完整CH3片段的基因。测序结果表明,RT-PCR产物的大小为469bp,该片段的核苷酸序列与GenBank收录的猪IgG1的核苷酸序列同源性为99.2%,与猪IgG2a、IgG2b、IgG3、IgG4的核苷酸序列同源性分别为89.7%、89.7%、96.7%和91.4%。从遗传进化树中可以看出,扩增片段与猪IgG1的遗传距离最近,位于同一分支上。这表明扩增的序列是猪IgG1亚型的。 2. 该片段编码的氨基酸序列长度为120,与猪源IgG的氨基酸序列具有较高的同源性,为79.2%~98.3%。与其他动物的IgG氨基酸序列的同源性低于68.3%。从推导的氨基酸序列可以看出,该片段中含有两个半胱氨酸Cys38和Cys98,与设计一致。 3. 将该片段通过连接子连接到表达载体pET-E中E基因的下游,构建了重组表达质粒pET-E-pFc。通过酶切鉴定插入目的基因的正确性,将其转化到宿主菌BL21(DE3)中。经过IPTG诱导表达和超声波裂解菌体后,使用SDS-PAGE进行可溶性分析。然后,使用His·Bind螯合层析柱和SPA亲和层析柱两种方法纯化融合蛋白。通过SDS-PAGE、薄层凝胶扫描、Western Blotting和iELISA对融合蛋白进行了鉴定,并分析了两种亲和层析方法的纯化效果。 参考文献 [1] Viral encephalitis of public health significance in India: Current status[J]. Rashmi Kumar. The Indian Journal of Pediatrics. 1999(1). [2] Japanese encephalitis virus nonstructural protein NS3 has RNA binding and ATPase activities[J]. Tsutomu Takegami, Daitoku Sakamuro, Toru Furukawa. Virus Genes. 1995(2). [3] A single gene controls resistance to Japanese encephalitis virus in mice[J]. K. Miura, T. Onodera, A. Nishida, N. Goto, Y. Fujisaki. Archives of Virology. 1990(3). [4] Maturation process of Japanese encephalitis virus in cultured mosquito cells in vitro and mouse brain cells in vivo[J]. T. Hase, P.L. Summers, K.H. Eckels, W.B. Baze. Archives of Virology. 1987(3). [5] 魏建超. 流行性乙型脑炎病毒E蛋白主要抗原域与猪IgG_1-Fc片段在大肠杆菌中的融合表达及其应用研究[D]. 南京农业大学, 2006.查看更多