凝胶阻滞分析(EMSA)试剂盒的应用及优势? 凝胶阻滞分析(EMSA)试剂盒(化学发光法)是一种用于检测Biotin标记的EMSA探针的化学发光检测试剂盒。该试剂盒采用了高质量的Streptavidin-HRP Conjugate,使得检测更方便且灵敏度更高。同时,试剂盒中还包含了结合缓冲液和上样缓冲液等关键试剂,可以实现非同位素的EMSA检测。 凝胶阻滞分析(Gel shift Assay,Gel Retardation)是一种研究DNA与特异性蛋白相互作用的方法。通过将放射性标记的DNA片段与纯化蛋白或蛋白混合物结合,然后在非变性凝胶中进行分析,可以观察到蛋白-DNA复合物的迁移率降低,形成带状的“阻滞”。该方法可用于检测DNA结合蛋白、RNA结合蛋白,并可通过加入特异性抗体进行特定蛋白的检测和未知蛋白的鉴定。 凝胶阻滞分析(EMSA)试剂盒具有多项优势。首先,试剂盒采用了非特异性结合比avidin更低的streptavidin,使得检测结果背景更低,灵敏度更高。其次,试剂盒中的结合缓冲液含有有效成分poly(dI-dC),可以消除蛋白和标记探针间的非特异性结合,同时又不会减弱目的转录因子和标记探针间的结合。此外,试剂盒可以用于20个蛋白和探针的结合反应,并足够检测至少2块有生物素标记的EMSA探针的膜。 凝胶阻滞分析(EMSA)试剂盒的应用 用于钝齿棒杆菌ArgR的凝胶阻滞实验及单增李斯特菌actA、inlB、p60表达载体的构建 该试剂盒可以应用于钝齿棒杆菌ArgR的凝胶阻滞实验以及单增李斯特菌actA、inlB、p60表达载体的构建。通过构建重组表达菌株和制备多克隆抗体,可以实现对ArgR的高效可溶性表达和检测。同时,通过凝胶阻滞实验可以验证ArgR对特定基因上游DNA序列的结合作用。此外,通过构建重组表达载体,为大量表达单增李斯特菌特异性膜蛋白抗原奠定了实验基础。 参考文献 [1] Improvement of L-arginine production by overexpression of a bifunctional ornithine acetyltransferase in Corynebacterium crenatum.[J].Dou Wenfang,Xu Meijuan,Cai Dongmei,Zhang Xiaomei,Rao Zhiming,Xu Zhenghong.Applied biochemistry and biotechnology.2011(3-4) [2] Interaction of transcriptional repressor ArgR with transcriptional regulator FarR at the argB promoter region in Corynebacterium glutamicum.[J].Lee Soo Youn,Park Jae-Min,Lee Jin Hyung,Chang Suk-Tai,Park Jin-Soo,Kim Yang-Hoon,Min Jiho.Applied and environmental microbiology.2011(3) [3] Offering surprises:TCA cycle regulation in Corynebacterium glutamicum[J].Michael Bott.Trends in Microbiology.2007(9) [4] Use of Monoclonal Antibodies That Recognize p60 for Identification of Listeria monocytogenes[J].Kang Y.Yu,Youngsoon Noh,Minsub Chung,Hong J.Park,Namseok Lee,Moonyeon Youn,Byeong Y.Jung,Byung S.Youn.Clin.Diagn.Lab.Immunol..2004(3) [5] 袁永.钝齿棒杆菌ArgR的凝胶阻滞实验及单增李斯特菌actA、inlB、p60表达载体的构建[D].南昌大学,2012. 查看更多