乙醇脱氢酶的作用是什么? 乙醇脱氢酶（Alcohol dehydrogenase，ADH）是一种含锌酶类，广泛分布于机体内，尤其在肝脏中含量最高。它在正常的生理代谢中起到催化乙醇（酒精）代谢的作用。在临床上，血液中ADH的含量可以作为诊断肝脏疾患的指标之一。当肝脏受损时，如急性中毒性肝损伤、酒精肝病、慢性活动肝炎等，ADH会从细胞内释放到血清中，导致血清中ADH的升高。 目前已经发现了人体内的7种ADH亚型，分别是ADH1A、ADH1B、ADH1C、ADH4、ADH5、ADH6和ADH7。 ADH1B的结构是怎样的？ ADH1B的晶体结构如下图所示： 如何制备人源的ADH？ 目前，人源的ADH主要通过原核表达方式进行生产。具体步骤包括从肝脏中提取mRNA，经过RT-PCR扩增目的基因，构建至表达载体，转化至表达感受态，然后在大肠杆菌中大量培养，诱导表达，最终通过纯化工艺获得纯品ADH。这种生产方式成本低，设备需求较少，其中最常用的培养基是M9，它的配制简单，原材料易于获取。 另外，人血清中ADH的检测常用的方法是双抗夹心酶联免疫分析（ELISA）。该方法具有高敏感性、强特异性、操作简便等优点。通过该方法可以建立标准曲线和方程，根据待测血清的OD值计算出相应的ADH含量。 在试剂盒的制备过程中，稀释液是影响试剂盒特异性和稳定性的重要因素之一。目前常用的稀释液中添加了BSA、酪蛋白、鸡标准血清、牛血清、马血清等成分，以提高试剂盒的抗干扰能力和稳定性。 主要参考文献 [1] 卢现英.ADH检测的临床新研究[J].中外医疗.2011.01(c):0192 [2] Niederhut, M.S., Gibbons, B.J., Perez-Miller, S., Hurley, T.D. Three‐dimensional structures of the three human class I alcohol dehydrogenases [J].Protein Science.2001,10(4):697-706查看更多
什么是Anti-Sox2抗体及其应用领域? Anti-Sox2抗体是一类多克隆抗体，以Sox2为抗原，可用于多种免疫学实验，如Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等。它能够特异性结合Sox2，用于检测和研究Sox2的功能和表达。 Sox2是SOX区域Y相关HMG蛋白家族的成员之一，是转录因子。在哺乳动物器官早期发育中，SOX蛋白家族发挥重要作用，尤其是Sox2。Sox2是调节哺乳动物胚胎发育的必要因子之一，参与胚胎植入和外胚层形成过程，并在胚胎神经上皮中表达。此外，Sox2也在维持胚胎干细胞的自我更新和多潜能性中起关键作用。同时，Sox2与其他转录因子Oct4(POU5F1)、Klf4、c-myc一起，可诱导多能干细胞的形成。 最近的研究发现，Sox2的表达调控对细胞分化具有较高的敏感性。微弱的变化就可能导致胚胎干细胞分化为多种细胞类型。Sox2不仅在胚胎干细胞中表达，也在早期胚胎神经细胞中表达，并发挥抑制神经干细胞分化的作用。此外，Sox2也被用于鉴定干细胞亚群。异常的Sox2表达与多种肿瘤，如结肠直肠癌和乳腺癌等有关。 Anti-Sox2抗体的应用 Sox2在乳腺癌转移和血管新生中的调控及机制研究 研究利用免疫组织化学染色方法检测乳腺癌组织中的Sox2表达，明确Sox2在乳腺癌发生和发展中的作用。通过体外实验进一步研究Sox2对肿瘤细胞转移特性的影响，并探讨潜在的分子机制。实验方法包括划痕实验、Transwell实验、ELISA、蛋白印迹和免疫荧光等。此外，通过双荧光报告系统和CHIP方法证明Sox2对目的基因的转录调控方式。最后，通过小鼠原位接种和转移模型对Sox2的调控作用进行体内实验验证。 另外，研究还在BAL/C小鼠的乳腺癌细胞株中建立了沉默Sox2的稳定细胞系，并在体内成瘤，建立了荷瘤小鼠模型。通过免疫荧光染色检测沉默Sox2后肿瘤组织中CD31和LYVE的表达变化。 此外，通过小鼠骨髓移植和荷瘤小鼠模型，研究了肿瘤新生血管系统的来源。结果显示，肿瘤的新生血管系统来源于宿主骨髓的内皮祖细胞，而不是肿瘤细胞的自分化。 通过对正常乳腺组织、癌旁组织和肿瘤组织中Sox2表达的检测，发现Sox2对乳腺癌的发生有促进作用。乳腺癌组织中Sox2的表达水平与临床分期和病理分级呈正相关。此外，对正常淋巴组织和乳腺癌转移淋巴结中Sox2表达的检测发现，在有乳腺癌细胞转移的淋巴结中，Sox2明显高表达。 参考文献 [1] Gangemi RM, Griffero F, Marubbi D, et al. SOX2 silencing in glioblastoma tumor-initiating cells causes stop of proliferation and loss of tumorigenicity. Stem Cells. 2009. [2] Gerhard Christofori. New signals from the invasive front. Nature. 2006. [3] N Ferrari, J Glod, J Lee, D Kobiler, H A Fine. Bone marrow-derived, endothelial progenitor-like cells as angiogenesis-selective gene-targeting vectors. Gene Therapy. 2003. [4] Huang Sheng-Dong, Yuan Yang, Tang Hao, Liu Xiao-Hong, Fu Chuan-Gang, Cheng He-Zhong, Bi Jian-Wei, Yu Yong-Wei, Gong De-Jun, Zhang Wei, Chen Jie, Xu Zhi-Yun. Tumor cells positive and negative for the common cancer stem cell markers are capable of initiating tumor growth and generating both progenies. PloS one. 2013. [5] Guinan P, Saffrin R, Stuhldreher D, Frank W, Rubenstein M. Renal cell carcinoma: comparison of the TNM and Robson stage groupings. Journal of Surgery. 1995. [6] 李雪霏. SOX2在乳腺癌转移和血管新生中调控及机制的研究[D]. 南开大学, 2013. 查看更多
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