怎样提高目标蛋白吸附到DEAE-Sephrose Fast Flow介质的量？不知楼主的纯化目标是什么？是只想得到较纯的目的蛋白做分析呢？纯度有何要求？还是需要优化工艺提高收率和分辨率？如果是后者，选择一个合适的填料是首要的，主要考察其结合能力、分辨率，可尝试一下强阴的Q；其次是筛选一个合适的上样条件，离子交换也就是筛选合适的上样pH，阴离子结合洗脱模式一般高于等电点0.5个pH以上，当然要注意上样时电导率低一些（一般 5 mS/cm）；在填料和上样条件确定的情况下，就要去测你目的蛋白的动态结合载量（DBC），这样，你才能确定你的上样量，避免流穿；洗脱可用线性梯度洗脱来提高分辨率和收率，再由线性洗脱条件转化为阶梯洗脱，以节约时间和Buffer。根据你的情况，建议降低上样量，看是否还会有流穿，用盐浓度线性梯度洗脱，0-20%B （1 M NaCl），20 CV，分管收集看主要成分在哪里。查看更多
第1天
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