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仙子上仙

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生物医学工程

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pull down和far western这两种方法各有什么优劣? 不知道你所说的与这个蛋白有相互作用的另一个大蛋白（300kDa）是怎么确定的？你的目的是什么？1、寻找这个蛋白的相互作用蛋白？or 2、验证这个蛋白与这个300kD蛋白的相互作用？如果是1，你最好还是用酵母双杂交进行筛选，然后再用pulldown或其他方法进行验证。用pulldown进行筛选会丢失很多相互作用蛋白。Far-western不适合用于筛选相互作用蛋白，它主要用于配体配基的筛选，而且必须是非变性条件下。再者，即便用pulldown或Far-western筛选到了一些蛋白，你得双向分离，质谱鉴定，实验室没有相关的设备是不行的。所以，酵母双杂交是首选。如果是2，这会简单些。酵母双杂交（不用建库）、GST-pulldown、co-IP、co-location都可以进行验证。GST-PULL down试剂盒都是so贵so贵的，而且没有必要必须买。你可以单买GSH偶联的琼脂糖珠，好像promega有，也不是很贵，也就几百RMB吧。查看更多

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生物医学工程

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SP600125是否可以加热助溶? 我看的大多文献是侧脑室注射的所以自己的实验也是用侧脑室注射溶剂是DMSO 如果你的实验不是研究脑组织的，可能不需要这样做吧因为sp600125具有细胞渗透性查看更多

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生物医学工程

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怎么样把产品从甲醇-甲苯溶液中析出来啊? 如果能“冰浴析晶”，那就趁冷快速抽滤。抽滤漏斗、滤纸、洗液等都要冰冷。然后产品再真空干燥除水（冷的样品会在空气中结露吸潮）。查看更多

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生物医学工程

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关于荧光EGFP表达丢失问题? 应该不会丢失的，你做个PCR，看看GFP还有没有？另外你怎么检测没有荧光？转染吗？可不可能是转染过程中出问题了呢？你的NC转染后有荧光吗？查看更多

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生物医学工程

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工艺技术

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结晶能力的比较? 高分子结晶具有不完全性。最易结晶的聚乙烯，其最高结晶度为95％，而一般高分子大多只有50％左右。高分子结晶的不完全性及其结晶能力的大小起因于大分子链结构特征。影响高分子结晶能力的结构因素有：链的对称性。链的规整性；共聚效应；链的柔顺性。查看更多

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生物医学工程

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是什么原因导致很多细胞不能贴壁而死亡，使培养液浑浊? 如果你是初次复苏细胞，建议你找有经验的学姐学长看一下。估计是你操作上有问题。污染的可能性较大。死细胞多不会使培养基混浊，肯定是细菌污染。查看更多

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生物医学工程

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有没有用台盼兰染过色，为什么我都染不上呢? 适当增加台盼蓝浓度试试？查看更多

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生物医学工程

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WB大家配制分离胶的时候上层用什么封? 浓度10%以上的分离胶用三蒸水压完全没有问题，浓度10%以下的分离胶推荐用异丙醇压。如果技术不好那就都用异丙醇压，异丙醇压闭着眼睛加都可以压不坏，但异丙醇味道忒难闻了压完以后要用三蒸水洗三次。查看更多

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化药

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RhoA/ROCK信号通路用wb，怎么选一抗啊? 我以前是做过Rho的信号通路的，我老板是这方面的专家，这个蛋白的活性非常难做，因为它会瞬间转化失活。所以你动作一定要快。其中Rho-GST是在cytoskeleton买的，记住只有这个公司有，总RhoA买santa的就好，我做过的，效果不错。查看更多

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生物医学工程

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工艺技术

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控制性孔的深度怎么确定? 在缺乏经验的地区，可考虑使用应力比法，因为该方法基本排除了地层及压缩性的因素，所涉及到土的重度指标离散性很小，经验值的误差不大。具体计算可在Excel软件上编个小程序解决。如果既缺乏工程经验，也没有计算条件，可采用简化公式法估算，因为该计算公式唯一的变量是基础宽度，这是比较容易把握的。查看更多

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生物医学工程

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为什么不能用冷藏的血提外周血单个核细胞呢? 我做过一个实验，血液4度放置还可以提取出活细胞，我做过33小时，还能分离出活细胞并养活。查看更多

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生物医学工程

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如何确定是不是A549细胞? 我觉得不是，养过很久的A549，这种密度下太细长了查看更多

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关于恒电流电沉积？ 其他情况不清楚，单从你的描述，当然是60mA，也就是电流密度恒定。查看更多

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生物医学工程

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微生物

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天根质粒小提试剂盒质粒浓度低的原因是什么? 1. 有可能你的那个阳性克隆是假的，这个可能性最大 2. 你的质粒是低拷贝的？ 3. washing buffer没有加酒精？查看更多

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生物医学工程

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为什么我的细胞复苏后细胞状态不好，有哪些原因，怎么解决? 冻存管的壁较厚，隔热，水浴时间太长：2min还没完全融化。解决方法：适当提高水浴温度（37度－40度）。如果是冬天，可以选用保温盒。查看更多

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生物医学工程

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有孔虫14C测年哪里做的好? 北大考古学中心中科院高能物理研究所社科院考古所查看更多

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生物医学工程

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细胞是否会内吞某种分子，并且内吞入细胞的分子是否有下游效应? 我没有做过小分子的entry，只做过病毒的entry，所以只能略知皮毛。小分子进入细胞，要么通过主动运输，要么通过被动扩散什么的。这其中的机制太多，假如该小分子是通过电荷吸附而运输，那么可以通过化学试剂，改变该分子或者细胞表面的电荷（印象里有这么做的），然后再看看细胞里面是否有荧光。此外，该荧光是否是细胞本身的自发荧光（所以需要tracker，做colocalization）。既然这个小分子在生理条件下是存在的，那么其理化和分子属性是已知的。所以，你纯粹从显微镜下考究其如何transport，结果往往似是而非。所以建议回到问题的本身，分析这个小分子的理化性质，从文献研究该分子可能的进入细胞途径。在明确这个大致轮廓的前提下，通过一系列的阻断剂，分步阻断该分子进入细胞的过程，从而判断你得到的信号是否有生物学意义。至少，我们在研究一个未知病毒对宿主细胞的侵袭途径时，是这么研究的。查看更多

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生物医学工程

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怀疑A蛋白通过PI3K/ART或MRPK通路引起细胞凋亡怎么做? 应该和PI3K/AKT或MAPK通路类似吧，一般选择磷酸化和非磷酸化抗体，通过有无A蛋白（细胞或组织中）刺激处理对照后，检测激酶磷酸化水平的差异，进而判断是否通过这一通路发挥作用。如果A蛋白刺激后磷酸化水平显著升高，说明它有可能同过上述通路发挥作用，进一步证明还要使用特异性阻滞剂阻断该通路，检测激酶磷酸化水平，若与刺激前无明显差异，则进一步证明与该通路密切相关查看更多

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化学学科

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如何完全除去溶剂吡啶? 稀盐酸多洗涤几次就差不多了查看更多

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生物医学工程

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细胞污染? 是白色念珠菌丢了吧查看更多

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简介

职业：江西理文化工有限公司 - 工艺员/技术员

学校：济宁学院 - 化学系

地区：贵州省

个人简介：真的猛士，敢于直面惨淡的人生，敢于正视淋漓的鲜血。查看更多

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