重组抗体制备服务及其应用？ 背景 [1-3] 重组抗体制备服务提供多种服务，包括重组IgG制备、scFv/Fab制备、双特异性抗体制备以及抗体和蛋白纯化服务等。 重组抗体，又称为基因工程抗体，是通过DNA重组技术对抗体基因序列进行改造和重组，构建在质粒上，并通过蛋白外源表达技术在适合的宿主细胞中表达获得的抗体。重组抗体解决了动物源抗体引起的人体排斥反应，实现了抗体的人源化，提高了抗体的效能。 重组抗体在疾病的诊断和治疗中有广泛应用，是研究和应用领域最有价值的研究对象。抗体制备技术经历了三个阶段： 第一阶段，通过抗原免疫高等动物，从动物的血清中纯化获得抗体，这种抗体被称为多克隆抗体。 第二阶段，杂交瘤技术问世，通过将无限增殖的骨髓瘤细胞与产生抗体的B淋巴细胞融合，生产出针对单一抗原决定簇的单克隆抗体。 第三阶段，通过基因工程技术改造动物生产的单克隆抗体的基因序列，使单抗性能更加符合应用需要，并能通过大规模细胞培养获得，这种抗体被称为重组抗体。 应用 [4][5] 抗黄曲霉毒素B1荧光重组抗体的制备研究 本研究将绿色荧光蛋白质与抗AFB1单链抗体进行融合表达，通过检测融合蛋白的荧光强度得到稳定的检测结果，为使用免疫学方法对AFB1进行稳定可靠的检测奠定了良好基础。 绿色荧光蛋白质（GFP）是从维多利亚水母中分离得到的，具有荧光稳定、无毒害、易于构建载体等优点，常作为报告基因应用于基因表达和蛋白质定位。抗AFB1单链抗体（ScFv）是由本研究室前期筛选获得的。本研究在ScFv和GFP的基础上构建了8种不同的重组质粒，并在大肠杆菌中进行了表达。经过筛选，最终获得了既具有抗体活性又有荧光活性的双重活性融合蛋白质。 本研究首先将筛选得到的抗AFB1的ScFv基因与GFP基因借助一个linker进行连接，分别构建了重组质粒pET22b-ScFv-GFP、pET22b-GFP-ScFv、pET32a-ScFv-GFP、pET32a-GFP-ScFv。将构建成功的重组质粒转化入表达宿主大肠杆菌E.coli BL21（DE3）中进行原核表达，经过Ni-柱纯化后得到目标蛋白质，然后对融合蛋白的活性进行酶联免疫法（ELISA）检测和荧光显微镜检测。 结果表明，BL21（DE3）/pET22b-ScFv-GFP和BL21（DE3）/pET32a-ScFv-GFP的表达产物抗体效价分别为0.930和0.918，但二者均无荧光活性。而BL21（DE3）/pET22b-GFP-ScFv和BL21（DE3）/pET32a-GFP-ScFv的表达产物则正好相反，即有荧光但无抗体活性。全细胞变性蛋白电泳结果表明，这四种重组蛋白在宿主菌内表达后可能发生了降解。 参考文献 [1]Intestinal Trefoil Factor Produced in Escherichia coli Promotes the Healing of Rat Burn-Induced Acute Gastric Mucosal Lesions[J].Yong Sun,Wei Wu,Yong Zhang,Shangjun Lv,Shiliang Wang,Xi Peng.The Journal of Trauma:Injury,Infection,and Critical Care.2008(1) [2]Efficient Isolation of Soluble Intracellular Single-chain Antibodies using the Twin-arginine Translocation Machinery[J].Adam C.Fisher,Matthew P.DeLisa.Journal of Molecular Biology.2008(1) [3]Gene expression and function study of fusion immunotoxin anti-Her-2-scFv—SEC2 in Escherichia coli[J].Xu Ming-Kai,Zhang Cheng-Gang.Applied Microbiology and Biotechnology.2006(1) [4]Expression and purification of a single-chain variable fragment antibody derived from a polyol-responsive monoclonal antibody[J].Jennifer A.Lamberski,Nancy E.Thompson,Richard R.Burgess.Protein Expression and Purification.2005(1) [5]刘蓉.抗黄曲霉毒素B_1荧光重组抗体的制备[D].江南大学,2010. 查看更多
脲醛树脂的应用及合成机理是怎样的? 脲醛树脂在木材工业中是一种主要的粘合剂，具有胶合强度高、固化快、操作性好、生产成本低、原料丰富易得等优点，因此被广泛应用。然而，脲醛树脂中的游离甲酸具有毒性，所以树脂中游离甲醛含量越低，毒性就越小。 脲醛树脂的形成机理是什么？ 脲醛树脂的合成机理至今尚未得到统一结论，因为尿素和甲醛之间的反应非常复杂。大多数学者认为，脲醛树脂的合成反应包括加成反应和缩聚反应两个阶段。首先，在中性或弱碱性介质中，甲醛与尿素进行加成反应，生成稳定的羟甲基脲。然后，在加热或酸性反应介质中，一羟甲基脲和二羟甲基脲发生脱水缩聚反应，形成线性结构。 脲醛树脂的应用领域有哪些？ 脲醛树脂可以在酸性介质中固化，常用的固化剂包括氯化铵、草酸、邻苯二甲酸、硫脲等。氯化铵作为固化剂可以使脲醛树脂在室温下固化。脲醛树脂胶黏剂主要用于木材加工工业中的胶合板和人造板的生产。 脲醛树脂的合成方法是怎样的？ 一种脲醛树脂的合成方法包括以下步骤： a. 将含有352重量份甲醛的甲醛水溶液和6重量份的聚乙烯醇混合，在40°C-45°C之间保温20分钟。 b. 在步骤a的产物中加入含氨总量为12重量份的氨水，在44°C-46°C反应10-15分钟。 c. 用氢氧化钠水溶液调节步骤b产物的pH值为8.5-9.0，加入尿素350重量份。 d. 将步骤c产物缓慢升温至88°C-90°C，保温反应30-40分钟。 e. 用甲酸水溶液调节步骤d产物的pH值为4.9-5.1，加入三聚氰胺7重量份。 f. 测雾点：将步骤e得到的胶液取样滴入55°C-60°C的水中呈云雾状时，进行步骤g。 g. 用氢氧化钠水溶液调节步骤f测好雾点的胶液的pH值为5.7-6.0，投入尿素90重量份。 h. 再测雾点：将步骤g得到的胶液取样滴入65°C-70°C的水中呈云雾状时，进行步骤i。 i. 用氢氧化钠水溶液调节步骤h测好雾点的胶液的pH值为8.0，投入尿素100重量份，在85°C-90°C温度下保温30分钟。 j. 将胶液冷却至75°C加入尿素50重量份，调节pH值为8.0-8.5，在70°C-65°C温度下保温30分钟。 k. 出胶。 查看更多
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