如何使用植物多酚氧化酶(PPO)ELISA试剂盒测定多酚氧化酶(PPO）水平? 植物多酚氧化酶(PPO)ELISA试剂盒是一种用于测定标本中多酚氧化酶(PPO）水平的双抗体夹心法。该试剂盒利用纯化的多酚氧化酶(PPO）抗体包被微孔板，形成固相抗体。然后，将多酚氧化酶(PPO）加入包被单抗的微孔中，并与HRP标记的多酚氧化酶(PPO）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过彻底洗涤后，加入底物TMB进行显色。颜色的深浅与样品中的多酚氧化酶(PPO）呈正相关。最后，使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中多酚氧化酶(PPO）浓度。 如何操作？ 1.标准品的加样：在标准品孔和样本孔中加入不同浓度的标准品。 2.加样：在空白孔和待测样品孔中加入样品稀释液和待测样品。 3.加酶：每孔加入酶标试剂。 4.温育：封板膜封板后置37℃温育60分钟。 5.配液：将浓缩洗涤液稀释后备用。 6.洗涤：揭掉封板膜，加入洗涤液进行洗涤。 7.显色：加入显色剂A和显色剂B进行显色。 8.终止：加入终止液终止反应。 9.测定：以空白孔为基准，使用酶标仪测量各孔的吸光度（OD值）。 该试剂盒的应用领域是什么？ 它如何用于小麦籽粒多酚氧化酶的研究？ 多酚氧化酶（Polyphenol Oxidase,PPO）是导致面制食品酶促褐变的主要因素。为了选育低PPO活性品种，需要快速、准确地检测小麦籽粒PPO活性，并研究PPO的生化特性以及控制基因与活性的关系。研究使用了24个小麦品种，探讨了以邻苯二酚代替L-DOPA检测小麦籽粒PPO活性的可能性，并验证了196个小麦品种。此外，还分析了小麦PPO的酶学特性、籽粒发育和萌发过程中同工酶的变化，以及化学试剂对小麦品种籽粒PPO活性的影响。通过分析基因序列和等位基因变异，初步探讨了内含子对PPO活性的影响，并提出了内含子参与PPO基因表达调控的可能性。 参考文献 [1] Allelic variation of polyphenol oxidase(PPO)genes located on chromosomes 2A and 2D and development of functional markers for the PPO genes in common wheat[J].X.Y.He,Z.H.He,L.P.Zhang,D.J.Sun,C.F.Morris,E.P.Fuerst,X.C.Xia.Theoretical and Applied Genetics.2007(1) [2] Variation in two PPO genes associated with polyphenol oxidase activity in seeds of common wheat[J].Cheng Chang,Hai-Ping Zhang,Jie Xu,Ming-Shan You,Bao-Yun Li,Guang-Tian Liu.Euphytica.2007(1-2) [3] Polyphenol oxidase(PPO)in wheat and wild relatives:molecular evidence for a multigene family[J].Alicia N.Massa,Brian Beecher,Craig F.Morris.Theoretical and Applied Genetics.2007(7) [4] Functional gene markers for polyphenol oxidase locus in bread wheat(Triticum aestivum L.)[J].Rosy Raman,Harsh Raman,Peter Martin.Molecular Breeding.2007(4) [5] 司红起.小麦籽粒多酚氧化酶生化特性及其控制基因的研究[D].安徽农业大学,2008. 查看更多
如何制备2,6-二氯-3-碘吡啶并应用于制备HPK1抑制剂? 2,6-二氯-3-碘吡啶是一种有机中间体，可用于制备具有二氮杂萘结构的HPK1抑制剂。这篇文章将介绍如何制备2,6-二氯-3-碘吡啶以及其在制备HPK1抑制剂中的应用。 制备过程 制备2,6-二氯-3-碘吡啶的方法如下： 首先，在-78°C的条件下，将二异丙胺和2,6-二氯吡啶依次添加至n-BuLi和THF的混合溶液中，并在-78°C下搅拌2小时。然后，加入碘的THF溶液，并使反应混合物达到室温。30分钟后，向混合物中加入H 2 O。通过萃取、洗涤和干燥的步骤，最终得到2,6-二氯-3-碘吡啶。 应用 2,6-二氯-3-碘吡啶可用于制备HPK1抑制剂。HPK1是一种调节多种免疫细胞功能的激酶，其激酶活性在多种细胞受体激活时被诱导。HPK1的过表达可以抑制特定基因的转录激活，从而阻断特定信号通路的传导。因此，制备具有二氮杂萘结构的HPK1抑制剂对于研究免疫细胞功能具有重要意义。 参考文献 [1] Delgado O, H. Martin Müller, Bach T. Concise total synthesis of the thiazolyl peptide antibiotic GE2270 A[J]. Chemistry - A European Journal, 2010, 14(8). [2] [中国发明] CN201880034930.5 作为HPK1抑制剂的二氮杂萘类 查看更多
2-氯-8-环戊基-5-甲基-8H-吡啶并[2,3-D]嘧啶基-7-酮的特性和用途？ 2-氯-8-环戊基-5-甲基-8H-吡啶并[2,3-D]嘧啶基-7-酮是一种杂环芳烃类化合物，可用作有机合成中间体。它的英文名为2-chloro-8-cyclopentyl-5-Methylpyrido[2,3-d]pyriMidin-7(8H)-one，化学式为C 13 H 14 ClN 3 O，CAS号为1013916-37-4，分子量为263.72。该化合物的熔点为176度到178度，密度为1.3，外观为黄色或暗黄色固体。 2-氯-8-环戊基-5-甲基-8H-吡啶并[2,3-D]嘧啶基-7-酮在有机合成中具有广泛的应用。它可以进行偶联反应，得到烷基化和芳基化的产物。此外，通过溴化反应，可以在双键上靠近羰基的位置引入一个溴原子。 然而，需要注意的是，2-氯-8-环戊基-5-甲基-8H-吡啶并[2,3-D]嘧啶基-7-酮作为一种含卤的有机化合物，对水环境具有较大的危害。因此，在使用过程中应避免未稀释或大量产品接触地下水、水道或污水系统。 为了保持其稳定性，2-氯-8-环戊基-5-甲基-8H-吡啶并[2,3-D]嘧啶基-7-酮应密封储存于低温（最好在2到8度）和干燥的环境中，最好是惰性气体保护的贮藏器内。同时，应避免与氧化物接触，并尽量避开碱性物质。 2-氯-8-环戊基-5-甲基-8H-吡啶并[2,3-D]嘧啶基-7-酮的合成方法 针对2-氯-8-环戊基-5-甲基-8H-吡啶并[2,3-D]嘧啶基-7-酮的合成，常规的方法是从5-溴-2-氯-N-环戊胺嘧啶-4胺出发，经过钯催化剂的作用，发生相应的Heck反应。得到的中间产物是一个酸，该酸在酸酐的作用下进行分子内的胺酯交换反应，形成内酰胺化合物，从而得到目标产物。因此，该反应实际上是两步反应。 参考文献 [1] Duan S, Place D, Perfect H H, et al. Palbociclib commercial manufacturing process development. Part I: control of regioselectivity in a grignard-mediated SNAr coupling[J]. Organic Process Research & Development, 2016, 20(7): 1191-1202. 查看更多
3'-溴苯乙酮的性质和应用？ 3'-溴苯乙酮是一种常温常压下呈浅黄色透明液体的化合物，具有半固体半液体的状态。它是一种苯乙酮类衍生物，在有机合成和医药化学中间体中广泛应用，特别适用于药物分子和生物活性分子的合成。此外，它还在基础化学研究和香料等精细化学品的研发中有一定的用途。 溶解性 3'-溴苯乙酮可溶于常见的有机溶剂，如乙酸乙酯、二氯甲烷和N,N-二甲基甲酰胺。它在低极性的醚类溶剂中也有良好的溶解性，但不溶于水。 应用转化 3'-溴苯乙酮可用作有机合成和医药化学中间体，主要用于药物分子的合成。在有机合成转化中，可以利用3'-溴苯乙酮中的溴单元进行芳基化或烷基化反应。此外，乙酰基结构也可以通过还原变成相应的醇，或通过烯基化反应转变为烯烃衍生物。 图1 3'-溴苯乙酮的应用转化 将3'-溴苯乙酮、盐酸羟胺和醋酸钠加入乙醇和水的混合物中，通过加热反应和冷却结晶得到目标产物分子。 图2 3'-溴苯乙酮的应用转化 在干燥的反应器中，将3'-溴苯乙酮、NBS和对甲苯磺酸溶于二氯甲烷中，通过微波加热反应得到溴化的目标产物分子。 参考文献 [1] Tang, Kai et al Organic & Biomolecular Chemistry, 19(34), 7475-7479; 2021 [2] Rodriguez, Juan C. et al Journal of Heterocyclic Chemistry, 57(5), 2279-2287; 2020 查看更多
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