人胃泌素细胞抗体(GCA)ELISA KIT的应用及研究? 背景 人胃泌素细胞抗体(GCA)ELISA KIT是一种用于测定标本中人胃泌素细胞抗体(GCA)水平的双抗体夹心法。该试剂盒利用纯化的人胃泌素细胞抗体(GCA)抗体包被微孔板,制成固相抗体。然后,将胃泌素细胞抗体(GCA)样品加入包被单抗的微孔中,并与HRP标记的胃泌素细胞抗体(GCA)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后,加入底物TMB进行显色。根据颜色的深浅和样品中的胃泌素细胞抗体(GCA)浓度的正相关关系,利用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人胃泌素细胞抗体(GCA)浓度。 胃泌素是一种重要的胃肠激素,主要由G细胞分泌。除了胃窦部,胃底、十二指肠和空肠等处也存在G细胞。此外,人的脑脊液和某些脑组织中也含有胃泌素。胃泌素对整个胃肠道具有多种作用,包括促进胃肠道的分泌功能、促进胃肠道的运动、促进胃及上部肠道粘膜细胞的分裂增殖以及促进胰岛素和降钙素的释放。 应用 用于抗人胃泌素单克隆抗体及其单链抗体的研制研究 该研究旨在建立能稳定分泌高亲和力、高特异性抗人胃泌素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对其亲和力、特异性以及生物学功能进行鉴定。研究人员通过将胃泌素合成肽与钥孔戚血蓝蛋白的偶联物作为免疫原,采用杂交瘤技术建立了能稳定分泌高亲和力抗人胃泌素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。随后,研究人员通过盐析和蛋白G亲和层析等方法获得纯化的单克隆抗体,并对其进行了分子量、纯度、效价、类和亚类、亲和力、特异性等方面的鉴定。此外,研究人员还通过斑点ELISA和免疫组化等方法对抗体的特异性进行了鉴定,并研究了抗体对胃泌素/胃泌素受体结合的阻断作用以及对SGC-7901细胞增殖的抑制作用。 在此基础上,研究人员选择了杂交瘤细胞株E8,并提取了总RNA。通过RT-PCR和重叠延伸PCR等技术,研究人员成功克隆了抗体可变区基因,并构建了抗人胃泌素单链抗体基因。随后,研究人员将单链抗体基因克隆到表达载体中,构建了重组表达质粒。 参考文献 [1] Baldwin GS, Shulkes A. Gastrin as an autocrine growth factor in colorectal carcinoma: implications for therapy. World J Gastroenterol. 1998. [2] Savage K, Khan K, Dhillon AP, et al. Trafficking of CCK-B/gastrin receptor in tumor cells using confocal microscopy. Gastroenterology. 1999. [3] Xie B, He SW, Wang XD. Effect of gastrin on protein kinase C and its subtype in human colon cancer cell line SW480. World Journal of Gastroenterology. 2000. [4] Caplin ME, Khan K, Savage K, et al. Expression of gastrin in hepatocellular carcinoma, fibrolamellar carcinoma and cholangiocarcinoma. Journal of Hepatology. 1999. [5] 王霞. 抗人胃泌素单克隆抗体及其单链抗体的研制[D]. 四川大学, 2004. 查看更多