为什么选择TUBULIN抗体作为内参抗体? 背景 [1-3] 在常规的Western检测中,TUBULIN抗体是一种用于识别α-tubulin的C-terminal的抗体。它是由纯化的微管蛋白制备而成的小鼠单克隆抗体。微管蛋白是细胞的一种骨架蛋白,其中α-Tubulin和β-Tubulin是形成微管的两种主要成分。β-Tubulin抗体通常被用作内参抗体,因为它的蛋白水平在常规条件下不会发生改变。它不仅可以用于Western Blotting的上样量一致性参照,还可以用于观察细胞的微管结构。β-Tubulin抗体也被称为βtubulin抗体或TUBB抗体。 应用 [4][5] 用于低温胁迫对甘蔗幼苗根系生长代谢的影响和相关基因α-tubulin的功能研究 该研究成功构建了pET30a(+)-α-tubulin原核表达载体,并通过IPTG诱导产生融合蛋白。重组蛋白经过纯化和透析浓缩后制备了单克隆抗体。ELISA法检测结果表明,所制备的α-tubulin单克隆抗体的效价高于1:512000。Western Blot检测结果显示,甘蔗α-微管蛋白获得了特异性的条带,证明α-微管蛋白单克隆抗体已成功制备。此外,利用qRT-PCR技术分析了α-tubulin基因在甘蔗中的转录水平表达,发现其在茎中表达量最高,根中次之,叶中最少。在低温胁迫下,α-tubulin基因的表达量先升高后降低,最后差异逐渐减小。通过Western Blot方法检测α-tubulin基因在甘蔗中的蛋白质水平表达,发现ROC22根中α-微管蛋白表达逐渐下降,而GT28中α-微管蛋白先升高后下降,但都高于对照。此外,研究还成功构建了烟草和甘蔗的表达载体,通过转基因技术获得了转基因烟草和甘蔗。 参考文献 [1]Climate Change and Sugarcane Production:Potential Impact and Mitigation Strategies[J].Duli Zhao,Yang-Rui Li,Glaciela Kaschuk.International Journal of Agronomy.2015 [2]Sugarcane Agriculture and Sugar Industry in China[J].Yang-Rui Li,Li-Tao Yang.Sugar Tech.2015(1) [3]Reactive Oxygen Species and Alternative Respiration in the Developing Flowers of Two Subtropical Woody Plants[J].Nan Liu,Zhifang Lin.Journal of Plant Growth Regulation.2013(1) [4]Arsenic-induced morphogenic response in roots of arsenic hyperaccumulator fern Pteris vittata[J].Laura Maria Costantina Forino,Monica Ruffini Castiglione,Giacomo Bartoli,Mirko Balestri,Andrea Andreucci,Anna Maria Tagliasacchi.Journal of Hazardous Materials.2012 [5]孙波.低温胁迫对甘蔗幼苗根系生长代谢的影响和相关基因α-tubulin的功能研究[D].广西大学,2016. 查看更多
如何合成L-天门冬氨酸? L-天门冬氨酸是一种在医药、食品和化工等领域广泛应用的氨基酸。它可以用于治疗心脏病、肝脏病和高血压等疾病,同时还具有防止和恢复疲劳的作用。此外,L-天门冬氨酸还可以与其他氨基酸一起制成氨基酸输液,用作氨解毒剂、肝功能促进剂和疲劳恢复剂。 合成方法 通过以下步骤可以合成L-天门冬氨酸: 首先,将氧杂硼烷酮(4 mmol)溶解在甲醇(8 mL)中,并加入浓HCl(4 mL)。在室温下搅拌反应混合物30分钟,然后蒸发溶剂。接下来,加入热THF(20 mL)并搅拌混合物15分钟。通过过滤收集沉淀物,并用热THF(20 mL)洗涤纯化得到L-天门冬氨酸。具体的合成路线可参考下图: 另外,还可以通过将尿素和马来酸的水溶液暴露在Xe准分子灯下照射,然后用6M HCl水解残留物,最终得到L-天门冬氨酸。具体的合成路线可参考下图: 应用领域 L-天门冬氨酸在食品工业中被广泛应用作为营养增补剂,可以添加于各种清凉饮料中。此外,它还是甜味素(阿斯巴甜)-天冬酰苯丙氨酸甲酯的主要原料。在化工领域,L-天门冬氨酸可以作为制造合成树脂的原料,也可用作化妆品的营养性添加剂等。目前,国内L-天门冬氨酸的生产规模已经达到20000t/a。此外,利用大肠杆菌菌体包埋固定化L-天门冬氨酸,结合高活力天门冬氨酸酶,可以用于工业化生产,将延胡索酸转化为天门冬氨酸。 参考文献 [1] 李仲福,卞涛.L-天冬氨酸的生产与应用进展[J].天津化工,2015,29(01):13-15. [2] Terasaki, Masanori; et al. A New Pathway to Aspartic Acid from Urea and Maleic Acid Affected by Ultraviolet Light. Origins of Life and Evolution of the Biosphere (2002), 32(2), 91-98. 查看更多