MDCK细胞无血清培养基的应用及优势？ 背景信息 MDCK细胞无血清培养基是一种用于MDCK细胞的传代培养的培养基。与传统的血清培养基相比，无血清培养基不需要添加血清或替代物。MDCK细胞可以直接转入无血清培养基中进行培养，无需经过血清浓度逐步降低的细胞驯化过程。 MDCK细胞无血清培养基不含胎牛血清成分，细胞培养过程中也不需要添加任何血清。使用无血清培养的MDCK细胞可以达到完全培养基（DMEM+10%FBS）培养的状态，连续传代50代，细胞特性无改变，生长速率优于完全培养基。MDCK细胞的倍增时间小于20小时。 MDCK细胞无血清培养基的化学成分经过限定，在流感病毒分离中能排除血清中类淀粉蛋白P等物质对病毒吸附的影响。同时，细胞可以直接转入无血清培养基中培养，无需经过血清浓度逐步降低的驯化过程。 MDCK细胞是来源于考克斯班尼犬肾脏的细胞系，具有远段肾小管与集合管的分化特性。MDCK细胞株至少有两种细胞类型，一种能形成囊肿，另一种则相反。 应用领域 用于流感疫苗生产的MDCK细胞无血清单细胞悬浮培养体系的开发研究 传统的流感疫苗生产多采用鸡胚培养过程，但该生产过程存在微生物污染、内毒素残余量高、对流感大流行应急能力差等问题。因此，动物细胞制病毒疫苗工业的发展变得尤为重要。MDCK细胞具有培养容易、增殖快、流感病毒感染效率高等特点，是适合用作流感病毒疫苗生产的重要细胞系之一。 通过调整培养基的成分，研制出了适合MDCK细胞无血清培养的培养基。在无血清培养基中培养MDCK细胞，可以获得高密度的细胞悬浮培养。此外，利用该无血清培养体系，对MDCK细胞生产流感病毒疫苗的操作参数进行了优化，获得了高滴度的病毒液。 参考文献 [1] Continuous cell lines as a production system for influenza vaccines[J]. Genzel, Reichl. Expert Review of Vaccines. 2009(12) [2] Wave microcarrier cultivation of MDCK cells for influenza virus production in serum containing and serum-free media[J]. Vaccine. 2006(35) [3] Two Different Serum-free Media and Osmolality Effect Upon Human 293 Cell Growth and Adenovirus Production[J]. Tiago B. Ferreira, Ana L. Ferreira, Manuel J. T. Carrondo, Paula M. Alves. Biotechnology Letters. 2005(22) [4] Effect of refeed strategies and non-ammoniagenic medium on adenovirus production at high cell densities[J]. T.B. Ferreira, A.L. Ferreira, M.J.T. Carrondo, P.M. Alves. Journal of Biotechnology. 2005(3) [5] 黄锭. 用于流感疫苗生产的MDCK细胞无血清单细胞悬浮培养体系的开发[D]. 华东理工大学, 2010. 查看更多
乙基锂的性质和应用？ 乙基锂是一种白色固体，其熔点为95°C，在80℃/10-3mmHg（0.13 Pa）时可以升华。它可以溶解在大多数有机溶剂中，常用于THF和乙醚中。乙基锂可以通过卤代烷与金属锂原位制备，也可以在国际大型试剂公司购买1 mol/L苯溶液的商品试剂。然而，乙基锂的干燥固体在空气中极易着火，溶液具有易燃性和腐蚀性，甚至会在遇水时发生剧烈反应。此外，乙基锂在低温下储存一周后，近一半的试剂会转化为乙烷、乙烯和乙醛。 乙基锂的相关反应 亲核加成反应 乙基锂可以作为亲核试剂与α,β-不饱和酮发生1,2-加成反应（式1），当有铜催化剂存在时，会发生1,4-加成反应（式2）。在加入六甲基磷酸三酰胺（HMPA）的情况下，1,4-加成的选择性会提高。此外，溶剂的配位能力也会影响这种选择性。乙基锂还可以在与β-苯基-α,β-不饱和醛反应时，在α-位进行加成（式3）。 在-78°C的条件下，乙基锂与α,β-不饱和糖酯反应可以高产率地生成1,4-加成产物，非对映异构体的选择性高达96%de（式4）。当乙基格氏试剂和铜试剂同时存在时，会生成另一种构型的化合物（式5）。 乙基锂还可以与乙炔和CO2反应，生成共轭烯酸（式6）。尽管该反应的产率较低，但所得到的烯键均为顺式。 亲核取代反应 在取代的环丁烯中，苯磺酰基可以被乙基锂取代为离去基团（式7）。乙基锂还可以与酯反应生成二乙基取代的叔醇（式8）。此外，乙基锂还可以与羧酸反应形成酮（式9），或与酰胺反应使酰胺键断裂形成酮（式10）。 与杂原子结合，在-60°C下，乙基锂与四配位辚盐{[(CH2)4P(CH2)4]+Cl-}反应可以得到螺环五配位有机膦烷化合物{EtP[(CH2)4]2}，但产率较低（式11）。 参考文献 1. Rezgui, F.; El Gaied, M. M.J. Chem. Res. (S) 1999,576. 2. Kanai, M.; Nakagawa, Y.; Tomioka, K. Tetrahedron 1999,55,3831. 3. Bremand, N.; Mangeney, P.; Normant, J. F. Tetrahedron Lett. 2001,42,1883. 4. Totani, K.; Asano, S.; Takao, K.; Tadano, K. Synlett 2001,11,1772. 5. Smith, A. B. Ill; Zheng, J. Synlett 2001,1019. 6. Snider, B. B.; Song, F. Org. Lett. 2001,3,1817. 7. Knapp, K. M.; Goldfiiss, B.; Knochel, P. Chem. Eur. J, 2003, 9, 5259. 8. He, Z.*, Yi, C. S.; Donaldson, W. A. J. Org. Chem. 2003,5,1567. 9. Beier, P.; O’Hagan，D. Chem. Commurt. 2002, 1680. 10. Vicario, J. L.; Rodriguez, M.; Badia, D.; Carrillo, L.; Reyes, E. Org. Lett. 2004, 6,3171. 11. Badioli, M.; Ballini, R.; Bartolacci, M.; Giovanna Bosica, G.; Torregiani, E.; Marcantoni, E. J. Org.Chem. 2002, 67,8938. 12. Monkowius, U.; Mitzel, N. W.; Schier, A.; Schmidbaur, H. J. Am. Chem. Soc. 2002,124,6126. 节选自：现代有机合成试剂 查看更多
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