正常驴血清的应用及研究进展？ 背景 [1-3] 正常驴血清是从未免疫的正常成年驴体内采集的血液加工而成，可应用于大多数免疫学实验，用作封闭液或空白对照。正常血清是用来描述来自没有用特异抗原进行免疫产生抗体的动物的血清。因此，正常血清与抗血清相对。 正常血清包含血清蛋白的一般补体，包括存在于特定物种健康动物体内的不同种类的免疫球蛋白。提供的正常血清产品经过脂类抽提以提高透明度，经去盐和透析处理以去除包含叠氮化钠的磷酸缓冲液，并最后冻干以获得冻干粉末。 正常血清非常适用于作为封闭试剂去除非特异性杂交。正常血清在检测一般或特异抗体纯化方法的时候也经常作为对照使用。 正常驴血清，来源于非免疫的驴宿主，经过脂质萃取和含NaN3的PBS溶液透析，改善其透明度。最佳的稀释比例需研究者通过实验来确定。建议的起始稀释比例如下：IHC-p（1：10-20），IF/ICC（1：10-20）和ELISA（1：100）。 推荐用PBS将封闭血清原液稀释5-20倍，配成5%-20%的工作液，直接滴加在组织切片或者细胞涂片上，37℃度孵育10-30分钟，清除血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗工作液，37℃孵育1-2h或4℃过夜。 注意：封闭用血清中不能含有目标蛋白，且与一抗来源不同，可用与二抗相同来源的封闭血清。 应用 [4][5] 驴血清PMSG免疫学早期妊娠诊断方法的研究 通过孕马血清促性腺激素（Pregnant Mare Serum Gonadotropin,PMSG）免疫检测条件、配种后PMSG最佳检出时期和PMSG血清免疫学检测符合率验证三部分内容,建立了成熟的PMSG检测方法,为驴早期妊娠检测纸条的制备奠定基础。研究结果如下:建立PMSG免疫学检测方法。 通过SDS-PAGE检测了PMSG抗原的纯度,Dot blot方法验证了能够与PMSG结合的抗体,采用Western Blot验证了PMSG与抗体以空间表位方式结合,并进一步通过ELISA方法建立PMSG浓度与吸光度值的酶标曲线,拟合方程为y=0.0045x+0.0202,R2=0.998;母驴妊娠后PMSG分泌规律。 采集配种后第2、3、4、5、6、7和8周的母驴血清,使用ELISA酶联免疫方法测定血清PMSG含量。从第5周开始,可检测到血清PMSG,且含量逐步增加,50 d达到峰值80 IU·mL-1,后续开始下降;临床验证。挑选15头配种母驴,并且直肠检查孕驴15头,利用本试验建立起来的血清免疫学检测方法检测配种5周后母驴血清,发现孕驴7头,未妊娠驴8头,孕驴阳性临床符合率为46.7%,检测配种6周后母驴血清,发现孕驴14头,未妊娠驴1头,孕驴阳性临床符合率为93.3%。 检测配种7周后母驴血清,发现孕驴15头,未妊娠驴0头,孕驴阳性临床符合率为100%。空怀母驴阴性对照15头,血清免疫学检测方法检测为15头,阴性临床符合率为100%。综上,通过血清PMSG酶联免疫检测早期妊娠母驴的检测时期为配种5周后,最佳检测时期为配种后6或7周。 参考文献 [1]A western blot assay to measure cyclin dependent kinase activity in cells or in vitro without the use of radioisotopes[J].Cody W.Lewis,Ryan G.Taylor,Philip M.Kubara,Kris Marshall,Laurent Meijer,Roy M.Golsteyn.FEBS Letters.2013(18) [2]Early pregnancy diagnosis in dairy cows using circulating nucleic acids[J].Jennifer Mayer,Jan T.Soller,Julia Beck,Vanessa Purwins,Wilhelm Wemheuer,Ekkehard Schütz,Bertram Brenig.Theriogenology.2013(1) [3]Early pregnancy diagnosis by palpation per rectum:Influence on embryo/fetal viability in dairy cattle[J].Juan E.Romano,James A.Thompson,Duane C.Kraemer,Mark E.Westhusin,David W.Forrest,Michael A.Tomaszweski.Theriogenology.2006(3) [4]Applications of an efficient method for comparing immunogold labelling patterns in the same sets of compartments in different groups of cells[J].Terry M.Mayhew,Gareth Griffiths,John M.Lucocq.Histochemistry and Cell Biology.2004(2) [5]于艳昌.驴血清PMSG免疫学早期妊娠诊断方法的研究[D].河北农业大学,2019. 查看更多
第1天
关注盖德视界
添加小助手
