对羟基联苯比色法测乳酸含量的原理?乳酸含量的测定,除高效液相、气相和 离子色谱 外,还有一种较为为常用且精确度很好的方法就是 对羟基联苯 比色法。由于实验室条件和样品量的关系,我最终确定用对羟基联苯比色法测乳酸。但是在整理具体分析方法的时候发现,不同文献中,所述实验原理和分析步骤有较大差别。现具体叙述,想和大家交流一下。 各文献所述 基本原理是:乳酸与浓硫酸共热被氧化为乙醛,然后乙醛与对羟基联苯发生显色反应,所呈颜色在w波长(565 nm,570 nm均有出现)下具有特征吸收峰,在一定范围内,乳酸含量与该峰处的吸光度呈线性关系。 但是反应期间有铜离子的催化作用,二其催化作用发挥在那个阶段,不同文献的表述不一。大部分中文文献中:乳酸在铜离子的催化下,与浓硫酸作用生成乙醛,乙醛能与对羟基联苯作用生成在w波长 处有特征吸收的紫色物质;在一定浓度范围内,乳酸含量与w波长 处吸光度呈线性关系,因此可以通过测定w波长 处的吸光度来测定乳酸的含量。而在外文文献中,铜离子发挥催化作用是在乙醛与对羟基联苯间显色反应阶段(两篇:[1] barker s b, summerson w h. the colorimetric determination of lactic acid in biological material[j]. journal of biological chemistry, 1941, 138(2): 535-554.;[2] barnett a j. the colorimetric determination of lactic acid in silage[j]. biochemical journal, 1951, 49(4): 527-529.)。 另外,对于铜离子添加的时间:一种是在前面:加待测液后,加入4%(w/v) 硫酸铜溶液 ,再加浓硫酸,再加对羟基联苯试剂进行显色;一种是在后面:加待测液,之后加浓硫酸,之后加4%(w/v)硫酸铜溶液,再加对羟基联苯试剂进行显色。到底哪个阶段前加铜离子,是在氧化乳酸成乙醛阶段前添加,还是氧化阶段后乙醛与对羟基联苯显色阶段前添加,还是只要在乙醛与对羟基联苯显色阶段前添加便可? 所以,这里的问题就是:(1)铜离子发挥催化作用的阶段,是催化乳酸与浓硫酸反应生成乙醛,还是催化乙醛与对羟基联苯显色反应,还是对两种反应均有催化作用;(2)硫酸铜溶液添加时间,是在加入待测液之后便添加硫酸铜溶液,还是在乳酸与浓硫酸反应之后且加对羟基联苯显色之前添加。 欢迎大家参与讨论,提出宝贵建议。 谢谢。查看更多6个回答 . 15人已关注