人二氢嘧啶酶样3(DPYSL3) ELISA试剂盒的原理是什么?

人二氢嘧啶酶样3(DPYSL3)Elisa试剂盒采用双抗体一步夹沁法酶联免疫吸附试验(ELISA)。在预先包被人-氢嘧啶酶样3(DPYSL3)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。然后使用底物TMB进行显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中的人二氢嘧啶酶样3(DPYSL3)呈正相关。最后，使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，并计算样品浓度。

试剂盒的组成

人二氢嘧啶酶样3(DPYSL3)Elisa试剂盒对标本的要求是什么？

1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成分时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成分时，用PBS (PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并释放出细胞内成分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8°C的温度。加入适量的PBS (PH7.4)，手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后留一份待检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20°C保存，但应避免反复冻融。

7. 不能检测含NaN3的样品，因为NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

主要参考文献

[1] Renata Kowara，Kristoffer Laser Moraleja，Balu Chakravarthy；Involvement of nitric oxide synthase and ROS-mediated activation of L-type voltage-gated Ca2+ channels in NMDA-induced DPYSL3 degradation。《Brain Research》