我们做方法验证的时候做回收率是验证选中的检测方法对在研杂质的检测情况与理论值的差别，这是针对检测方法而言的，和计算方法没关系。做回收率只需要用杂质对照品外标法做就行了，验证了检测方法对杂质回收较好，后面收标准只要校正因子在要求范围内，就可以收加校正因子的主成分自身对照法了。况且，计算回收率的时候是需要对杂质准确定量的，若用校正因子法验证的话，本身这个结果就是一个相对值，不是绝对值，又谈何准确定量呢。在做精密度和耐用性的时候，涉及到对样品中杂质量的计算，这个时候就应该用校正因子法。

1、反应液检测，看你关注什么指标，一般是主成分纯度，还有上一步反应物残留量，以及杂质量。。面积归一法。。专属性、检测限、重复性等等；2、杂质标定要么用对照品外标法，要么用质量守恒原理。含量 ％=(100.0- 水分值 - 有机溶剂含量 - 无机杂质含量 )×色谱纯度×100％。也有其他方法；3、这个根据实际情况确定，一般是中间体控制，成品一定研究，根据研究结果确定是否定入标准。

碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase)是一种在碱性环境中催化磷酸酯水解的酶。它的表达水平和活性变化与肝脏和骨骼的多种病理状态相关。联科生物提供的碱性磷酸酶活性检测试剂盒采用4-硝基苯磷酸盐(pNPP)作为底物，能够方便、快捷、灵敏地检测哺乳动物血清及其他生物样品中的碱性磷酸酶活性。

试剂组分

使用方法

1. 试剂准备：将所有试剂(包括检测样品)取出并恢复至室温。标准品工作液：取15 μl p-nitrophenol溶液(10 mM)，用检测缓冲液稀释至0.3 ml，最终浓度为0.5 mM。

2. 检测方案参考如下。标准品的用量分别为2、4、8、16、24、32和40 μl，推荐进行两次重复。样品通常加入50 μl，如果样品中的碱性磷酸酶活性过高，可减少样品用量或适当稀释。为了消除有色样本本身颜色的影响，需要设立样品对照孔，即加入样本，以检测缓冲液代替显色底物的对照。

3. 加入所有样品后，在微孔板震荡器上震荡混匀数十秒。在37℃避光条件下孵育5-10分钟。如果待测样品中碱性磷酸酶活性较低，可适当延长孵育时间至30分钟。

4. 每孔加入100 μl终止液终止反应。

5. 在405 nm或400-415 nm范围内检测吸光度。如果不能立即测定，可在数小时内完成测定，所显现的黄色在数小时内稳定。

6. 结果计算：将标准品孔的OD值减去空白对照孔的OD值，校准后的标准品孔OD值与对应的p-nitrophenol浓度建立标准曲线。样品孔的OD值减去样品对照孔的OD值，校准后的样品OD值代入标准曲线，计算p-nitrophenol浓度。碱性磷酸酶活性(U/ml) = A/V/T。其中A为样品中产生的p-nitrophenol量(μmol)；V为样品体积(ml)；T为反应时间(min)。

7. 碱性磷酸酶活性单位的定义：在pH9.8的DEA缓冲液中，37℃条件下，每分钟水解pNPP显色底物产生1 μmol p-nitrophenol所需的碱性磷酸酶的量定义为一个酶活力单位，也被称作一个DEA酶活力单位。在pH9.6的甘氨酸缓冲液中，25℃条件下，每分钟水解pNPP显色底物产生1 μmol p-nitrophenol所需的碱性磷酸酶的量定义为一个酶活力单位，也被称作一个Glycine酶活力单位。一个Glycine酶活力单位约相当于3个DEA酶活力单位。本试剂盒测定的是DEA酶活力单位。

注意事项

1. 在使用本产品之前，请仔细阅读说明书。本产品仅用于科研，不可用于诊断。

2. 为了您的安全和健康，请穿戴实验防护服、手套、口罩等必要的防护装备。

3. 样品中不能含有磷酸酶抑制剂，如EDTA、草酸盐、氟化物和柠檬酸盐等。

4. 所有样品避免反复冻融，建议分装后冻存。

5. 血清样品通常需进行10倍稀释，其他样品可进行梯度稀释，使OD值落于标准曲线检测范围内。可使用原裂解液或PBS或本试剂盒提供的检测缓冲液进行稀释。

参考文献

磷酸酶活性分析试剂盒产品介绍

左旋苯甘氨酸乙基邓钾盐是一种重要的有机化合物，其合成与检测具有广泛的研究意义。本文将探讨如何有效合成和准确检测左旋苯甘氨酸乙基邓钾盐，以期为相关领域的研究提供参考和指导。

简介：左旋苯甘氨酸乙基邓钾盐是生产氨苄青霉素、氧哌嗪青霉素、头孢氨苄、头孢氯氨苄等半合成抗生素的一种重要的中间体。其产品的质量控 制直接影响该类抗生素的生产及产品质量。由于左 旋苯甘氨酸乙基邓钾盐容易水解?目前一直未见有关左旋苯甘氨酸乙基邓钾盐的高效液相色谱测定方法。含量测定均采用高氯酸非水滴定法。

合成：

传统左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐合成工艺是D(-)苯甘氨酸和甲醇在浓硫酸的催化下进行合成的,但催化效果一般,再者浓硫酸有一定的氧化性,容易使底物碳化。文献上也有先合成外消旋体再进行拆分,但工艺存在原料利用率低,毒性大 等缺点。1989年,Miller小组尝试通过酒石酸修饰的硼氢化钠还原α-肟基苯乙酸甲酯来实现不对称合成苯甘氨酸甲酯盐酸盐,遗憾的是产物没有任何的对映选择性。最近,Micsker等用Cr(Ⅱ)的天然氨基酸配合物为催化剂,对映选择还原 α-肟酰基苯乙酸,ee值达到了30.5,仍旧很低。因此,选择合适的催化体系,提高反应的产率和对映选择性,是这一领域的重要研究课题。

以甲醇、D(-)苯甘氨酸为主原料,催化剂、异丙醇为辅助原料,经过酯化、重结晶、干燥等步骤得到左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐。同时大大减少了“三废”的排放,减少对环境的污染,具有很大的社会环境效益和经济效益,产品各项性能指标处于国内领先水平。

检测：

1. 文献(河北工业科技,2011,28(5),288～290) 建立了测定左旋苯甘氨酸乙基邓钾盐含量的高效液相色谱方法。采用Thermos C18色谱柱，流动相为0．01 mol／L磷酸盐缓冲液（含0．2％（体积分数）三乙胺，85％（体积分数）磷酸调节pH值为3．0）-乙腈（体积比为5∶95）为流动相，检测波长为220 nm。样品在pH值为2．0条件下水解后以水解产物苯甘氨酸为外标，计算左旋苯甘氨酸乙基邓钾盐的含量。左旋苯甘氨酸乙基邓钾盐质量浓度在2～20 mg／mL范围内线性关系良好（r＝0．999 9），回收率为96％～98％。

2. 专利CN 108088929 B提供了一种左旋苯甘氨酸乙基邓钾盐的分析方法，采用高效液相色谱法测定左旋苯甘氨酸乙基邓钾盐被测样品中左旋苯甘氨酸、左旋苯甘氨酸乙基邓钾盐的含量，采用C18 色谱柱，以乙腈与异丙醇、乙腈与四氢呋喃或乙腈与二氧六环的混合溶液为流动相，通过制备对照品溶液、被测样品溶液，采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，在合适的色谱条件下，分别精密量取被测样品溶液和对照品溶液注入液相色谱仪；记录被测样品和对照品的色谱图，按外标法以峰面积计算，即得被测样品中左旋苯甘氨酸和左旋苯甘氨酸乙基邓钾盐的含量。该发明操作过程简单方便，精确度高，稳定性好，可有效避免杂质对测定结果的影响。具体步骤为：

（a）对照品溶液的制备：精密称定左旋苯甘氨酸标准品、左旋苯甘氨酸乙基邓钾盐标准品，分别加流动相溶解，并定量稀释制成浓度为0.02 ~ 0.5mg/mL的左旋苯甘氨酸标准对照品溶液、左旋苯甘氨酸乙基邓钾盐标准对照品溶液，摇匀、定容；

（b）被测样品溶液的制备：精密称定左旋苯甘氨酸乙基邓钾盐样品，加流动相溶解，并定量稀释制成浓度为0.02 ~ 0.5mg/mL的左旋苯甘氨酸乙基邓钾盐被测样品溶液，摇匀、定容；

（c）色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相流速为0.2 ~ 2.0mL/min；检测波长为285 ~ 300nm；柱温为20℃ ~  30℃；

（d）测定法：分别精密量取被测样品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪；记录被测样品和对照品的色谱图，按外标法以峰面积计算，即得被测样品中的左旋苯甘氨酸和左旋苯甘氨酸乙基邓钾盐的含量。

参考文献：

[1]赵磊, 左旋苯甘氨酸乙基邓钾盐. 浙江省,浙江云涛生物技术股份有限公司,2014-11-24.

[2]哈婧,刘晓争.RP-HPLC法测定左旋苯甘氨酸乙基邓钾盐的含量[J].河北工业科技,2011,28(05):288-290+294.

[3]天津大学,华北制药股份有限公司. 一种左旋苯甘氨酸乙基邓钾盐的分析方法:CN201711373013.3[P]. 2020-05-29.

紫苏叶油来源于唇形科植物紫苏(Perilla frutescens(L.)Britt.)的干燥叶(或带嫩枝叶)，为具有强挥发性的浅黄色或黄色澄清液体，带有紫苏特异香气，味微辛辣。露置空气中或贮存日久，色渐变深，质渐浓稠。在乙醇、乙醚或石油醚中易溶，在水中几乎不溶。

紫苏叶油是评价紫苏叶质量优劣的重要物质之一，同时其具有解表散寒、行气和胃的功效，常添加于多种中药复方制剂如藿香正气系列药品中，具有很强的分析价值。

在传统分析方法中，紫苏叶油通常由干燥紫苏叶经水蒸气蒸馏法提取而得。该提取方法虽经典简单，但也表现有诸多不足，主要体现在：1.耗时：提取时间在在2小时以上；2.药材用量大：平均一次提取需用药材至少100g。此外，紫苏种质资源丰富，不同紫苏叶间挥发油含量差异大，低出油率的紫苏叶甚至无法采用水蒸气蒸馏法获得足够的紫苏叶油进行实验分析。另一方面，传统分析方法多采用GC检测，以对照品和紫苏叶油样品保留时间一致作为组分峰的判别与测定方式，既可能出现组分判定不准确的情况，也在组分认知与测定上存在受限于对照品种类的问题。

目前，紫苏叶油的组分分析测定方法主要参照2015年版《中国药典》一部关于藿香正气口服液项下所附紫苏叶油质量标准进行。该标准采用紫苏叶油对照提取物及紫苏烯、紫苏醛对照品作为双重对照，从紫苏叶油指纹图谱与指标性成分两个方面对紫苏叶油进行分析测定。而我国紫苏的化学型有PK型(主要成分为紫苏酮)、PA型(主要含紫苏醛和柠檬烯)、EK型主含香薷酮(elsho-ltziaketone)等单萜)、PP型(以芹菜脑主要成分的PP-a型；以肉豆蔻醚为主要成分的PP-m型；以榄香素为主要成分的PP-e型；以细辛脑为主要成分的PP-as型)及PL型(主含紫苏烯(perillene)等单萜)5个化学型，其中紫苏烯型是极为稀有的化学类型。故该标准在实际应用过程中有一定的使用限制，以至于本领域的技术人员无法采用该方法实现不同种质来源(不同化学型)的紫苏叶(油)组分分析，从而无法更进一步评价紫苏叶(油)的质量。

发明内容

基于背景技术存在的技术问题，本发明目的在于提供一种紫苏叶油组分含量分析方法。

一种紫苏叶油组分含量分析方法，方法步骤如下：

1)供试品的制备：称取紫苏干燥药材50g，粉粹，以备用，精密称取药材粉末0.1000g，于15mL专用采样瓶中，置于温度为65-75℃的水浴锅中，插入已老化的装有萃取头的手动进样器，推出针头，萃取25-35min后取出，立即插入气相进样口，脱附5min；

2)标准品的的制备：取正十七烷50mg于250mL的容量瓶中，正己烷-无水乙醇体积比1:1；

3)GC测试；

4)MS测试。

柴油机使用的柴油主要有2种：轻柴油和军用柴油。 1．轻柴油 汽车使用的柴油发动机转速都在1000 r／min以上，必须使用轻柴油，才能保证发动机正常工作，充分发挥其动力性和经济性。国家标准(gb 252--87)规定，轻柴油分为优级品、-级品、合格品3个质量等级。优级品是指油料质量达到国际先进水平；-级品是油料质量达到国际-般标准；合格品是油料质量达到国内平均先进水平。每个等级又分为10号、0号、-10号、 -20号、-35号、 50号6个牌号，它们分别表示该型号柴油的凝点不高于牌号的数值。 2．军用柴油 军用柴油是由石油直馏馏分经脱蜡精制而得的轻柴油，按质量分为优级品和-级品，每个等级根据凝点分为-10号、 -35号、-50号3个牌号。军用柴油主要用于坦克和舰艇的柴油机，也可用于柴油车。 如何正确选用 -般来说，应根据柴油车发动机的特征(转速、最大功率、气缸压缩压力等)、发动机润滑性能及不同地区和季节选用不同牌号的轻柴油(气温低的地区应选用低凝点即高牌号的柴油；反之，气温高的地区应选用凝点较高即牌号越低的柴油)。 1．级别的选择 车用柴油的优级品、-级品及合格品在质量指标方面主要区别于硫的含量。考虑到我国发动机润滑油的现状，汽车用柴油机应选用硫含量在0.2%～0.5%之间的轻柴油，否则会造成-些不良后果。 2．牌号的选择 为保证柴油机正常工作，提高经济效益，在气温季节允许的情况下，尽量选择高凝点的柴油，-般选择柴油冷滤点或凝点应较最低气温低3～5℃。柴油的冷凝点与实际操作使用温度之间有着直接的对应关系，故选择柴油时，应根据柴油的冷凝点，对照当地风险率为10%的最低气温选择柴油牌号。可参照以下原则进行选用： (1)轻柴油 0号柴油适于风险率为10%的最低气温在4℃以上的地区使用； 10号柴油适于有预热设备的高速柴油机使用； -10号柴油适于风险率为10%的最低气温为-5℃以上的地区使用； -20号柴油适于风险率为10%的最低气温为-5～-15℃的地区使用； -35号柴油适于风险率为10%的最低气温为-14n-29℃的地区使用； -50号柴油适于风险率为10%的最低气温为-29～-44℃的地区使用； (2)军用柴油 -10号柴油适于风险率为10%的最低气温为-5℃以上的地区使用； -35号柴油适于风险率为10%的最低气温为-14～-29℃的地区使用； -50号柴油适于风险率为10%的最低气温为-29～-44℃的地区使用；

巴马亭是一种藤本植物所含的生物碱，其盐酸盐称为黄藤素，是一种植物抗菌素。黄藤素具有溶解性强的特点，可用于治疗妇科炎症、外科感染、菌痢等多种疾病。

目前常用的制剂有片剂和注射剂两种，口服用量为0.2g～0.4g，一日0.6～1.2g。巴马亭红碱是一种对照品，含量测定用的标准品，具有抗白血病活性和抑制酶的作用。

巴马亭红碱的应用

巴马亭红碱可用于制备一种治疗百日咳的复合西药。该复合西药根据百日咳的认识机理对原料成分进行严格挑选，具有起效快、作用稳定、携带服用方便、长期服用无毒副作用的特点。

主要参考资料

[1] CN200510060266.6巴马亭及其盐类的合成工艺

[2] CN201611171973.7一种治疗百日咳的复合西药

背景信息

人细胞角蛋白20(CK-20)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验法来检测样本中细胞角蛋白20(CK-20)的浓度。

实验原理是将人细胞角蛋白20(CK-20)捕获抗体包被在微孔中，然后依次加入标本、标准品和HRP标记的检测抗体。经过温育和洗涤后，使用底物TMB进行显色。颜色的深浅与样品中的人细胞角蛋白20(CK-20)浓度呈正相关。最后，使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，并计算样品浓度。

人细胞角蛋白20(CK-20)ELISA试剂盒是一种用于检测样本中细胞角蛋白20(CK-20)浓度的试剂盒。

操作步骤

1. 从室温平衡20分钟后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔中加入不同浓度的标准品50μL。

3. 样本孔中加入待测样本50μL，空白孔不加。

4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，使用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60分钟。

5. 弃去液体，使用吸水纸拍干，每孔加满洗涤液(350μL)，静置1分钟，甩去洗涤液，使用吸水纸拍干。重复洗板步骤5次(也可使用洗板机洗板)。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15分钟。

7. 每孔加入终止液50μL，在15分钟内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用领域

垂体ACTH腺瘤细胞角蛋白CK7/CK20的对照表达及与其生物学行为的关系研究

通过对垂体ACTH腺瘤中细胞角蛋白CK7/CK20的对照表达进行研究，探讨其与肿瘤的生物学行为的关系，为临床评估垂体ACTH腺瘤患者的预后以及筛选侵袭性垂体ACTH腺瘤等提供参考。

方法：对28例病理检查为垂体ACTH腺瘤的切片，应用免疫组化SP法检测垂体ACTH腺瘤切片中CK7/CK20的表达，并与临床资料进行关联。结果显示，在CK7切片组中有14例表达，其表达与患者性别、肿瘤大小、有无Cushing综合征无关，但在侵袭性垂体ACTH腺瘤中的表达显著高于非侵袭性ACTH腺瘤（P<0.05）；在CK20切片组中有16例表达，与患者性别、侵袭性、肿瘤大小、有无Cushing综合征无关；并且CK7与CK20在垂体ACTH腺瘤中的表达无差异性。

结论：垂体ACTH腺瘤中CK7和CK20的表达较高；CK7的表达可作为判断垂体ACTH腺瘤侵袭性生物学行为的参考指标之一。

参考文献

[1] Clinical utility of cytokeratins as tumor markers[J]. Vivian Barak, Helena Goike, Katja W. Panaretakis, Roland Einarsson. Clinical Biochemistry. 2004(7)

[2] Management of pituitary apoplexy[J]. Chanson, Lepeintre, Ducreux. Expert Opinion on Pharmacotherapy. 2004(6)

[3] Simple Numerical Chromosome Aberrations Characterize Pituitary Adenomas[J]. Cancer Genetics and Cytogenetics. 1999(2)

[4] Localization of TIMP-1, TIMP-2, TIMP-3, gelatinase A and gelatinase B in pathological human corneas[J]. M.C. Kenney, M. Chwa, A. Alba, M. Saghizadeh, Z.-S. Huang, D.J. Brown. Current Eye Research. 1998(3)

[5] 胡少勇. 垂体ACTH腺瘤细胞角蛋白CK7/CK20的对照表达及与其生物学行为的关系[D]. 华中科技大学, 2007.

现在的合成类激素药物和天然药物提取不能一概而论，需具体的项目具体分析，举个例，青霉素目前都是发酵后提取的，化学合成成本高，合成难度大。
而维生素E目前都是合成的，天然提取有，成本大。简单说天然药物主要成本是集中于提取物的有效含量，资源是否易得以及分离方法的难度。而合成主要是反应选择性是否好，反应是否可行是关键。激素类药物按化学本质可分为氨基酸衍生物类、多肽与蛋白质类、甾体类和脂肪酸衍生物类⋯ 。它们可以通过天然提取、生物技术和化学合成技术获得。肽与蛋白质激素通常由人体特殊的腺体合成和分泌，天然提取的激素不但来源困难，而且易受致病菌和病毒污染。生物技术和化学合成技术使大量生产药用人体激素成为可能。目前，国内外上市的肽与蛋白质激素药物已达几十种。直到通过DNA重组技术生产的重组激素类药物出现，多肽合成技术的成熟及其成本的降低，才使大规模使用人类激素药物治疗成为可能。一些较为成熟的品种已收载于相关药典中。详见表1和表2。五种药典收载的原料药有32种，《中国药典~2oo5年版(ChP2005)和《美国药典》(USP29)收载的原料药标准各有10个，《欧洲药典》(EP 5．5)收载了23个，《英国药典》(BP2007)收载了3个，《日本药典》(1，尸14)收载了6个。其中由动物组织提取的天然激素有尿促性素(人尿)、抗利尿激素(垂体后叶)、尿促卵泡素、赖氨酸加压素(垂体后叶)、高血糖素(猪胰脏)、绒促性素(孕妇尿)、尿促性素、垂体后叶粉、甲状腺粉、胰岛素(猪胰脏)10个品种，占32％ ；化学合成的肽类激素有缩宫素、促肾上腺皮质激素类似物、盐酸长抑素、鲑降钙素、依降钙素、去氨精加压素、苯赖加压素、酒石酸普罗瑞林、亮丙瑞林、五肽胃泌素、醋酸丙氨瑞林16个品种，占52％ ；通过基因工程技术生产的激素有人胰岛素、戈那瑞林、醋酸戈那瑞林、布舍瑞林、戈舍瑞林、普罗瑞林、生人高血糖素、门冬胰岛素、赖脯胰岛素、人生长激素5个品种，占16％ 。收载的制剂有30种，我国2005年版药典和EP5．5以及BP2007收载的制剂标准各有13个，USP29收载了5个，l，尸14收载了4个。其中提取的天然激素有11个品种，占37％ ；化学合成的激素有13个品种，占43％ ；通过基因工程技术生产的激素有6个品种，占20％ 。化学合成和生物合成的激素原料药和制剂占到了63％ ～68％ ，高纯度肽与蛋白质激素类药物占主导地位。1．2 质控特点 ， ]由动物组织提取的天然激素的质控侧重于生物活性和常规安全性试验方面。由于产品纯度较低，鉴别和效价测定多采用体内生物学方法，活性单位定值常需要具有国际单位的标准品校准。如促卵泡激素(FSH)生物活性测定采用幼大鼠卵巢增重法；而用IRMA试剂盒测定r—hFSHa的免疫活性。促黄体生成激素(hLH)采用幼大鼠精囊增重法。尿促性素(hCG)采用幼小鼠子宫增重法鉴别供试品是否具有生物活性，并用标准品测定供试品的活性。胰岛素是比较标准品与供试品引起小鼠血糖下降的作用。降钙素是比较标准品与供试品对大鼠血钙降低的程度。人生长激素的活性分析采用测定幼龄去垂体大鼠体重增加和胫骨骨骺板宽度增加的程度。来源于人体体液的终产品还要检查乙肝病毒表面抗原和艾滋病毒抗原。通过基因工程技术生产的药用人体激素涉及到生物材料和生物学过程，如发酵、细胞培养、分离纯化目的产物等，这些过程有其固有的易变性，必须对原材料、培养过程、纯化工艺过程、最终产品进行全面的质量控制.质控内容主要有：结构确认、理化和免疫鉴别、纯度分析、外源污染物与特有残留杂质检查、含量测定和生物活性等。更注重产品批问的一致性和与对照品的同质性。同质性鉴别多采用至少两种不同机理的方法，如采用RP—HPLC、免疫印迹、SDS—PAGE、化学合成的肽类激素质控侧重于氨基酸组成分析、比旋度测定，相关肽和有机残留检查、HPLC含量测定、安全性检查等。鉴别试验多采用HPLC法比较色谱图中供试品主峰保留时间是否与对照品峰保留时间一致；或采用TLC法鉴别供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点是否相同。纯肽的氨基酸组成分析通常需将多肽彻底水解成单个氨基酸，再将氨基酸衍生化后进行定量检测，可由此得到氨基酸组成之间的比值和计算出总肽量。多肽的