什么是MONOCLONAL ANTI-GAPDH小鼠抗? MONOCLONAL ANTI-GAPDH小鼠抗是一种特异性结合ANTI-GAPDH的单克隆抗体,可用于多种免疫学实验,如Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等。 检测原理:采用双抗体夹心法测定标本中ANTI-GAPDH水平。首先将纯化的ANTI-GAPDH抗体包被在微孔板上,形成固相抗体。然后依次加入ANTI-GAPDH和HRP标记的ANTI-GAPDH抗体,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后,加入底物TMB进行显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,然后在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅与样品中的ANTI-GAPDH呈正相关。通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),可以计算样品中ANTI-GAPDH的浓度。 GAPDH或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)的英文缩写。GAPDH是糖酵解反应中的一个酶,在各种组织的细胞中广泛分布。 GAPDH是参与糖酵解的关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量为146kDa,检测条带大约在36kDa。GAPDH基因在几乎所有组织中都高水平表达,被广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。由于GAPDH作为管家基因在同种细胞或组织中的蛋白质表达量一般是恒定的,因此在使用GAPDH内参抗体时,可以将每个样品测得的目的蛋白含量与本样品的GAPDH含量相除,得到每个样品目的蛋白的相对含量,然后再进行样品与样品之间的比较。 MONOCLONAL ANTI-GAPDH小鼠抗的应用领域是什么? 用于研究GAPDH在帕金森病发病机制中的作用 本研究旨在研究鱼藤酮对PC12细胞内糖酵解关键酶GAPDH的表达、亚细胞定位及糖酵解活性的影响。 研究方法:将鱼藤酮作用于体外培养的神经生长因子诱导分化的PC12细胞,使用FITC-Annexin V/PI染色和流式细胞仪检测细胞凋亡水平;通过实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹分析检测鱼藤酮对PC12细胞内GAPDH mRNA和蛋白表达水平的影响;使用亚细胞组分分离和Western blot观察GAPDH的亚细胞定位变化;采用分光光度法测定鱼藤酮处理后细胞内GAPDH糖酵解活性的改变。 研究结果显示,鱼藤酮可以诱发PC12细胞凋亡,而且鱼藤酮处理后细胞内GAPDH mRNA和蛋白表达水平随时间的延长呈升高趋势。然而,随着处理时间的延长,GAPDH的糖酵解酶活性反而下降。亚细胞组分分离和Western blot进一步证实,鱼藤酮处理后GAPDH主要在细胞核和线粒体组分内增多。 结论:鱼藤酮可以诱发GAPDH的过表达,抑制GAPDH的糖酵解活性,并导致GAPDH亚细胞定位的改变。这可能是鱼藤酮诱导的多巴胺能神经元凋亡的重要机制之一。 参考文献 [1]The increasing role of monoamine oxidase type B inhibitors in Parkinson's disease therapy[J].Elmer,Bertoni.Expert Opinion on Pharmacotherapy.2008(16) [2]Role of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase in vesicular transport from Golgi apparatus to endoplasmic reticulum[J].A.V.Bryksin,P.P.Laktionov.Biochemistry(Moscow).2008(6) [3]On the key role played by altered protein conformation in Parkinson's disease[J].L.F.Agnati,E.Baldelli,N.Andreoli,A.S.Woods,V.Vellani,D.Marcellino,D.Guidolin,K.Fuxe.Journal of Neural Transmission.2008(9) [4]Chronic inhalation of rotenone or paraquat does not induce Parkinson's disease symptoms in mice or rats[J].Ana I.Rojo,Carmen Cavada,María Rosa de Sagarra,Antonio Cuadrado.Experimental Neurology.2007(1) [5]黄金莎.GAPDH过表达及异常聚集在帕金森病发病机制中作用的研究[D].华中科技大学,2009. 查看更多
如何制备5,5'-双(二苯基磷)-四氟-二-1,3-苯二氧杂环? 在金属配合物的合成中,我们可以使用外消旋或手性二膦5,5'-双(二苯基磷)-四氟-二-1,3-苯二氧杂环作为双齿配体,用作不对称催化氢化的催化剂。这种配体的优点是通过不对称诱导直接导致制备光学纯的异构体,而不必进行外消旋混合物的拆分。 制备步骤 下面是制备5,5'-双(二苯基磷)-四氟-二-1,3-苯二氧杂环的步骤: 1)将5g苯并二恶烷和100ml无水四氢呋喃在无光下置于氩气下。然后加入5.12g二溴二甲基乙内酰脲,将反应混合物在室温避光下搅拌18小时,蒸发一半的四氢呋喃后,加入50ml戊烷,过滤,重复操作三遍,然后在减压下蒸发掉溶剂。所得油状残余物通过硅胶柱色谱纯化,用8/2,v/v的环己烷/乙酸乙酯混合物洗脱(产率=90%),制备4-溴-1,2-乙撑二氧苯。 2)将4-溴-1,2-亚乙基二氧苯,氯二苯膦和200毫升无水二甲基甲酰胺置于0°C的氩气下。然后分批加入54.9g的溴琥珀酰亚胺。逐渐回到室温后,将反应混合物搅拌24小时。减压蒸发掉溶剂,并将获得的白色固体用二氯甲烷洗涤。滤液用50ml饱和硫酸钠水溶液处理,用50ml饱和氯化钠水溶液洗涤,用硫酸镁干燥。减压蒸发溶剂后,获得黄色油5,5'-双(二苯基磷)-四氟-二-1,3-苯二氧杂环(定量收率)。 参考文献 [1] FR2830254 - NOUVELLES DIPHOSPHINES, LEURS COMPLEXES AVEC DES METAUX DE TRANSITION ET LEUR UTILISATION EN SYNTHESE ASYMETRIQUE 查看更多