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克隆小白有问题请教～～～平板无菌落TT？求助盆友们～最近做了一个月的cloning无果… 很悲伤详情如下：载体10787bp EcoRI 和BglII双酶切酶切位点很近都是NEB的酶取5ugDNA 50ul体系酶切后成功胶回收浓度大概160ng/ul PCR产物200bp 为了提高片段浓度合并了几次pcr产物然后胶回收过夜双酶切也用的50ul体系酶切后用PCR产物纯化Kit 得到PCR产物浓度大概200ng/ul 连接用了20ul体系 T4 连接酶 1ul 载体4ul PCR产物6ul 室温连接两小时后转化第二天平板特别干净无克隆菌落… 这是第三次做这个实验了之前两次也是没有克隆不过加的载体和PCR产物量比较少所以这次加大量还是无果… 表示不知道什么原因每次跑胶看条带也都很正常实在找不到症结所在 TT 求助大家伙儿……… 查看更多 2个回答 . 9人已关注

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高泡沫洗车液？ 三聚磷酸钠 ---0.5% AES-------3% 磺酸------0.5% K12-------1.5% 拉丝粉 -----0.2% 融水性硅油 ---5% 卡松--------0.5% 香精查看更多 1个回答 . 20人已关注

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做不对衬自由基的大牛有哪些？ 做不对称自由基的大牛有哪些？在线等急查看更多 1个回答 . 9人已关注

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反蛋白石用什么软件可以画出来啊？ 如题。查看更多 3个回答 . 15人已关注

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高效液相色谱峰出峰时间滞后？ 对照品，流动相都是一样的，一个前天晚上测得。一个今天早上测得时候时间滞后，求解答查看更多 1个回答 . 15人已关注

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请问泵吸入口会有渣，吸入口如何做呢？用穿孔管加丝网可以吗? 请问泵吸入口会有渣，吸入口如何做呢？用穿孔管加丝网可以吗？查看更多 4个回答 . 3人已关注

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安装包求助？ 求引物设计安装包( Primer 5) 查看更多 2个回答 . 18人已关注

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PVDF静电纺丝，不是纤维而是粉末怎么办？ pvdf用的FR304，分子量30万左右。溶剂用的dmf和乙酸乙酯，后加纳米氧化锌，溶液呈乳白色。8％至18％的浓度都试过了。纺的时候针头附近呈现一条雾状的细丝，离针头远一些就什么也看不到了，喷到滚筒上像霜一样，而不是纤维。有时滚筒上会出现一个圆环，圆环内是湿的，有小液珠，圆环外面能看到白色的粉末物质。此时我应该升高还是降低浓度？查看更多 3个回答 . 19人已关注

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富电子体系有吡啶环，是否会对体系的傅克产生影响？ 求大神，帮忙看看这两个傅克反应能不能进行，吡啶会不会与三氯化铝络合而使反应失败。吡啶.PNG查看更多 1个回答 . 2人已关注

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球磨Ni和WC一般球磨多长时间，转速为多少！论文中没有找到！？ 球磨Ni和WC一般球磨多长时间，转速为多少！论文中没有找到！大家方便给留个言！查看更多 3个回答 . 14人已关注

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空白介孔硅Zeta电势接近0或者为正? 我的制备方法是CTAB，超纯水，TEOS为硅源，NaOH调碱性环境，乙醇和HCl混合溶液回流24h去除模板剂CTAB，干燥后重分散测粒径在200左右没问题，但是文献里电势在-36左右，为什么我却是-0.04～7左右，大神们帮帮忙！！拜托拜托！查看更多 2个回答 . 9人已关注

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是否还要针对现有品种做一个5ml的灭菌柜验证? 一个注射剂的品种，装量是5ml，121℃/15min灭菌条件，现在的灭菌设备已经做过2ml和20ml的灭菌柜的验证（热分布、热穿透、微生物挑战）；是否还要针对现有品种做一个5ml的灭菌柜验证？谢谢了查看更多 1个回答 . 18人已关注

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如何检测一个蛋白的乙酰化水平? 要做一个蛋白的乙酰化水平，不知道是直接用anti-acetylated lysine antibody还是用Co-IP的方法，看了一下文章里面都是直接用Co-IP的方法，可不可以直接用乙酰化的抗体呢？查看更多 1个回答 . 13人已关注

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组装纽扣电池时弹片方向反了会怎样？ 如题，弹片反了会造成什么问题，弹片凹的方向是贴着垫片的吧？查看更多 1个回答 . 3人已关注

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分离天然产物，关于硅胶柱层析的困惑？分离天然产物，没有目标产物，我先说一下我的理解：先用TLC选择一个较好的展开体系，如果确定的展开剂比例为4：1，那过硅胶柱的时候就以8：1的比例开始梯度洗脱，洗脱至4:1,一般即可。我现在不明白的是：1.确定的展开剂比例为4：1的前提是在此比例下，Rf值为0.2左右，是哪个点的Rf为0.2，跑的最远的那个点吗，这里说的是梯度洗脱？如果是等度洗脱的话，应该是所需点的Rf在0.2左右，且与其他成分分的比较开？ 2.在梯度洗脱的过程中，比如从8：1洗脱到4：1，那中间更换的比例怎么确定呢？是直接随意选一个然后接样后，再用TLC合并相同组分吗？查看更多 1个回答 . 16人已关注

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不同浓度的乙醇作为粘合剂对制剂处方有影响吗? 原研产品使用的乙醇浓度为96%（这个浓度我很奇怪，不一般都是95%的吗？），我用了50%的乙醇，API在处方中占0.44%，属于快速溶出的类型，我的自制片明显比原研快很多（处方中其他辅料为乳糖、玉米淀粉（内）、硬脂酸镁、硬脂酸和玉米淀粉（外）），这是由于乙醇浓度不同造成的吗？查看更多 1个回答 . 18人已关注

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如何得到圆滑规则的结晶晶体? 一个简单的结晶生产，大概过程是溶解后打入结晶器，蒸发结晶，进3-4个批次物料，蒸发结束然后降温、离心、干燥，但产品形状补规则，请问该如何控制？查看更多 1个回答 . 5人已关注

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这两个异构体，因为1位羟基的异构，会对1,2,3位氢造成什么样的影响? 这两个异构体的氢谱情况，各位帮忙分析下看看，这两个异构体，因为1位羟基的异构，会对1,2,3位氢造成什么样的影响？查看更多 1个回答 . 1人已关注

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原料药含量测定方法怎么选择? 在可以用液相测定的条件下，为什么原料药的含量测定多用滴定法，对应的制剂用液相法？药典中也多是这样，如枸橼酸芬太尼及其注射液和片剂，盐酸可乐定及其片剂，硫酸沙丁胺醇及其片剂，氧氟沙星及其片剂等。如果原料既可以用滴定法也可以用液相法，我该用哪一种方法。查看更多 4个回答 . 13人已关注

#原料药

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丙烯酰氯的合成方法产率不高? 最近用亚硫酰氯和丙烯酸合成丙烯酰氯（40摄氏度），但产率一直不高（38%),请高手指点一下。我的这个反应在减压蒸馏提纯时只能蒸出一点点（检查过气密性，温度在４０度）．而且用对本二酚做阻聚剂时产率更低．是不是阻聚剂的问题？查看更多 6个回答 . 2人已关注

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简介

职业：上海纳诺微新材料科技有限公司 - 工艺专业主任

学校：河南师范大学 - 化学化工学院

地区：四川省

个人简介：莪对妳旳爱就像埃菲尔铁塔旳构造、坚不可摧。查看更多

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